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碘化丙啶 PI 染色液（50µg/ml）

產(chǎn)品貨號：G6230

產(chǎn)品規(guī)格：10ml/50ml

產(chǎn)品簡介：

  碘化丙啶染色(PI stain)可以對細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡進(jìn)行分析。碘化丙啶 (Propidium Iodide, PI)是一種可以嵌 合到雙鏈DNA和RNA的堿基對中并與之結(jié)合的熒光染料，無堿基特異性。碘化丙啶與雙鏈DNA結(jié)合后可以產(chǎn)生 熒光，并且熒光強(qiáng)度和雙鏈DNA的含量成正比。細(xì)胞內(nèi)的DNA被Propidium Iodide染色后，可以用流式細(xì)胞儀對 細(xì)胞進(jìn)行DNA含量測定，然后根據(jù)DNA含量的分布情況，可以進(jìn)行細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的分析。碘化丙啶染色 后，假設(shè)G0/G1期細(xì)胞的熒光強(qiáng)度為1，那么含有雙份基因組DNA的G2/M期細(xì)胞的熒光強(qiáng)度的理論值為2，正在 進(jìn)行DNA復(fù)制的S期細(xì)胞的熒光強(qiáng)度為1～2之間。凋亡細(xì)胞由于細(xì)胞核發(fā)生濃縮以及發(fā)生DNA的片段化(DNA fragmentation)導(dǎo)致部分基因組

   DNA的片斷在染色過程中丟失，因此凋亡細(xì)胞碘化丙啶染色后呈現(xiàn)明顯的弱染，即熒光強(qiáng)度小于1，在流式檢 測的熒光圖上出現(xiàn)所謂的sub-G1峰，即凋亡細(xì)胞峰。細(xì)胞凋亡時，流式細(xì)胞檢測可呈現(xiàn)亞二倍體核型的特征，根 據(jù)光散射的特點(diǎn)，PI染色可以區(qū)分細(xì)胞凋亡和細(xì)胞壞死的細(xì)胞峰型。細(xì)胞凋亡時，出現(xiàn)凋亡細(xì)胞皺縮、染色質(zhì)濃 縮、核碎裂，產(chǎn)生凋亡小體，使細(xì)胞的前向光散射低于正常。在細(xì)胞凋亡的早期，細(xì)胞對前向角光散射的能力顯 著降低，對側(cè)向光散射的能力增加或沒有變化。在細(xì)胞凋亡的晚期，前向和側(cè)向光散射的信號均降低。細(xì)胞壞死 時細(xì)胞多表現(xiàn)為細(xì)胞腫脹，因此前向光散射高于正常，對側(cè)向光散射高于正常。

  尚寶生物 碘化丙啶PI染色液(50μg/ml)主要由PI、破膜劑等組成，經(jīng)常用于培養(yǎng)的貼壁或懸浮細(xì)胞的細(xì)胞周 期與細(xì)胞凋亡檢測，亦可用于區(qū)分細(xì)胞凋亡和細(xì)胞壞死。PI染色液工作濃度為20～50μg/ml，不含RNase，*用 于RNA染色，細(xì)胞檢測含量范圍一般為0.1～1×10⁶之間。

產(chǎn)品內(nèi)容:

自備材料：

1. 胰蛋白酶消化液

2. 流式細(xì)胞儀

3. PBS

4. 預(yù)冷固定液：預(yù)冷的70%乙醇或4%多聚甲醛

操作步驟（僅供參考）：

1. 細(xì)胞樣品的制備：

⑴貼壁細(xì)胞：

① 小心收集細(xì)胞培養(yǎng)液到一個無菌離心管內(nèi)備用。

② 用胰蛋白酶消化細(xì)胞至可以被輕輕用移液管或槍頭吹打下來時，加入前面收集的細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下所有的 貼壁細(xì)胞，并輕輕吹散細(xì)胞。

③ 收集上述細(xì)胞懸液到離心管內(nèi)。

④ 4℃，1000g離心3～5min，使細(xì)胞沉到管底。小心吸取上清并丟棄，可留大約50μl培養(yǎng)液，以免吸走細(xì)胞。

⑤ 加入約1ml提前預(yù)冷的PBS，重懸細(xì)胞，并轉(zhuǎn)移至1.5ml無菌離心管。

⑥ 4℃，1000g離心3～5min，使細(xì)胞沉到管底。

⑦ 小心吸取上清并丟棄，可留大約50μl PBS，以免吸走細(xì)胞。

⑧ 輕輕彈擊離心管底以適當(dāng)分散細(xì)胞，避免細(xì)胞成團(tuán)。

⑵懸浮細(xì)胞：

① 4℃，1000g離心3～5min，使細(xì)胞沉到管底。

② 小心吸取上清并丟棄，可留大約50μl培養(yǎng)液，以免吸走細(xì)胞。

③ 加入約1ml提前預(yù)冷的PBS，重懸細(xì)胞，并轉(zhuǎn)移至1.5ml無菌離心管。

④ 4℃，1000g 離心3～5min，使細(xì)胞沉到管底。

⑤ 小心吸取上清并丟棄，可留大約50μl PBS，以免吸走細(xì)胞。

⑥ 輕輕彈擊離心管底以適當(dāng)分散細(xì)胞，避免細(xì)胞成團(tuán)。

2. 細(xì)胞的固定：

  加入1ml冰浴預(yù)冷70%乙醇中，輕輕吹打混勻，4℃條件下固定2h或更長時間。4℃固定12～24h 可能效果更佳。

3. 細(xì)胞的清洗：

①4℃，1000g 離心3～5min，使細(xì)胞沉到管底。

② 小心吸取上清并丟棄，可留大約50μl溶液，以免吸走細(xì)胞。

③ 加入約1ml提前預(yù)冷的PBS，重懸細(xì)胞，并轉(zhuǎn)移至1.5ml無菌離心管。

④4℃，1000g離心3～5min，使細(xì)胞沉到管底。

⑤ 小心吸取上清并丟棄，可留大約50μl PBS，以免吸走細(xì)胞。

⑥ 輕輕彈擊離心管底以適當(dāng)分散細(xì)胞，避免細(xì)胞成團(tuán)。

4. PI染色：

  在每個待檢細(xì)胞樣品中加入500μl配制好的PI染色工作液，輕輕重懸細(xì)胞沉淀，置于37℃避光水浴 30min。

5. 檢測與分析：

  用流式細(xì)胞儀在激發(fā)波長488nm波長處檢測紅色熒光，同時檢測光散 染色結(jié)果： 凋亡細(xì)胞G1峰左側(cè)出現(xiàn)亞二倍體細(xì)胞群的峰型，在光散射譜上，前向光散射低于正常，側(cè)向光散射高于正常。

注意事項(xiàng)：

1. 熒光染料都存在淬滅的問題，建議染色后盡快檢測。

2. 為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液。

3. 在為了獲得細(xì)胞沉淀的離心的過程中，對于特殊細(xì)胞，如果細(xì)胞沉淀不充分，可以適當(dāng)提高離心力或延長離 心時間。

4. 如果用于組織的細(xì)胞周期不細(xì)胞凋亡檢測，則必須把組織消化后，制備成單細(xì)胞懸液，才可以進(jìn)行檢測。

5. 細(xì)胞凋亡時，凋亡細(xì)胞的標(biāo)志之一是DNA可染行降低，但這種情況并是的，DNA含量的降低或者 DNA 與染料結(jié)合能力下降也會導(dǎo)致 DNA 可染行降低，在分析的時候應(yīng)特別注意。

6. PI對人體有一定刺激性，請注意適當(dāng)防護(hù)。

7. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

有效期： -20℃儲存，6個月有效。4℃儲存, 1 個月有效。