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吖啶橙/溴化乙錠雙熒光染色試劑盒

產品貨號：26330

產品規(guī)格：100T

產品簡介：

  細胞凋亡(Apoptosis)的檢測方法有形態(tài)學、生物化學、DNA的片段化檢測方法以及TUNEL等標記片段化DNA 方法，但從細胞凋亡概念產生的歷史及準確性方面考慮，使用顯微鏡進行的形態(tài)學觀察也是很重要的。細胞死亡 的檢測可以通過熒光色素染色區(qū)分活細胞、死細胞，測定細胞代謝活性和形態(tài)學觀察。這些方法都是利用細胞凋 亡這種情況進行測定的，因而不一定反映實際情況。MTT法是測定線粒體中*酶的活性，反映細胞數目的變化， 其結果與細胞死亡的數目未必*一致。

  吖啶橙(Acridine Orange, AO)屬于三環(huán)雜芳香燃料，可以標記DNA、RNA,屬于異染性熒光染料，AO常用于 細胞內DNA和RNA進行檢測。AO與核酸結合方式主要有：1、插入性結合，AO嵌入核酸雙鏈的堿基對之間，這 種結合方式主要為AO與DNA的結合，其熒光發(fā)射峰為530nm，激發(fā)后呈綠色熒光；2、靜電吸引，帶正電荷的AO 與單鏈核酸的磷酸根(帶負電荷)產生靜電間的吸引結合，這種結合方式主要為AO與RNA的結合，其熒光發(fā)射峰為 640nm，激發(fā)后呈紅色熒光，少量結合會呈桔黃色或桔紅色熒光。因此，吖啶橙嵌合到雙鏈DNA分子中顯綠色， 與DNA單鏈或RNA結合時發(fā)橙紅色熒光。

  溴化乙錠(Ethidium Bromide,EB)嵌合到雙鏈DNA或RNA的堿基對中，無堿基特異性，發(fā)紅色熒光。吖啶橙可 透過活細胞膜，EB不能通過與活細胞膜具有相同通透性的細胞膜。

產品內容:

產品名稱 規(guī)格 保存溫度 試劑（A）：AO solution 200ul 4℃，避光 試劑（B）：EB solution 200ul 室溫 試劑（C）：AO/EB Dilution Buffer 50ml 4℃，避光

自備材料：

1. 熒光顯微鏡

2. PBS

3. 細胞計數板

4. 載玻片、蓋玻片

操作步驟（僅供參考）：

1. AO/EB工作液的配制：取試劑（A）、試劑（B）、試劑（C）,試劑（A）：試劑（B）：試劑（C）按照一 定的比例稀釋成AO/EB工作液。

2. 每份細胞樣品中加入AO/EB工作液，混合均勻。

3. 低速離心：離心，棄上清。

4. 用AO/EB Dilution Buffer重懸細胞，細胞計數，將細胞密度調整。

5. 細胞懸液中，加入AO/EB工作液，充分混勻。

6. 取潔凈載玻片，滴加上細胞懸液，輕輕蓋上蓋玻片。

7. 在熒光顯微鏡B域進行觀察。 染色結果： 活細胞 綠色熒光 死細胞 橙色熒光

注意事項：

1. 用能通過活細胞膜與DNA結合后發(fā)藍色熒光的Hoechist 33342和只能通過死細胞與DNA結合后發(fā)紅色熒光 的碘化吡啶( propidium iodide，PI)對細胞進行雙染的方法也比較常用。

2. 如有低溫離心機進行離心效果更佳。

3. 操作過程中應注意減少試劑(A)、試劑(B)暴露于強光下的時間。

4. EB solution有一定毒性，請小心操作。

5. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

有效期：

6個月有效。