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雙縮脲總蛋白試劑

產(chǎn)品貨號：T15260

產(chǎn)品規(guī)格：100ml/500ml

產(chǎn)品簡介：

雙縮脲是一種用于分析蛋白質(zhì)的方法，雙縮脲反應(yīng)的原理是在呈藍色的堿性硫酸銅溶液存在的情況下，銅離子與肽鍵形成有色螯合的銅復(fù)合物，呈紫色。所產(chǎn)生的顏色密度與參與反應(yīng)肽鍵數(shù)成比例?？赏ㄟ^比色法分析濃度，在紫外可見光譜中的波長為540nm。雙縮脲法測定蛋白濃度兼容性亦很好，不受大部分樣本中其他成分的影響，但易受銅離子螯合劑影響，另外，對于血清總蛋白的雙縮脲分析，膽紅素、脂類、血紅蛋白、葡聚糖具有一定干擾作用。

尚寶生物 雙縮脲總蛋白試劑由硫酸銅、酒石酸鉀鈉、氫氧化鈉等組成，在10～160mg/ml濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系，是對蛋白質(zhì)的精確定量分析試劑。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

• 分光光度計或酶標(biāo)儀
• 96孔板或離心管

雙縮脲總蛋白試劑操作步驟(僅供參考)：

• 取1ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制液或稀釋液加入到蛋白標(biāo)準(zhǔn)(BSA)中，充分溶 解后配制成160mg/ml的蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液，配制后可立即使用，溶解后的蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液應(yīng)-20℃保存。

特別提示：待測蛋白溶解于什么樣的稀釋液中，蛋白標(biāo)準(zhǔn)也宜溶解于什么樣的稀釋液中。例如待測蛋白溶解于蔗糖中，亦取蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶解于蔗糖中。一般也可以用0.9%NaCl或PBS作為溶解BSA稀釋液。

• 將標(biāo)準(zhǔn)品按0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20μl加到96孔板的標(biāo)準(zhǔn)品孔，加稀釋液補足至20μl。
• 加適當(dāng)體積待測蛋白樣本到96孔板的樣品孔中。如果標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液與溶解待測蛋白樣本的溶液不同，應(yīng)在待測蛋白樣本孔中加入20μl稀釋液；如果標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液與溶解待測蛋白樣本的溶液相同，無需在待測蛋白樣本孔中加入 20μl 稀釋液。
• 各孔加入200μl 雙縮脲總蛋白試劑, 室溫放置10～15min。
• 測定540nm波長處的吸光值，如無540nm，520～562nm之間的波長也可。
• 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出樣品的蛋白濃度。

注意事項：

• 待測蛋白溶解于什么樣的稀釋液中，蛋白標(biāo)準(zhǔn)也宜溶解于什么樣的稀釋液中，否者待測蛋白與蛋白標(biāo)準(zhǔn)中所含非蛋白成分不一致，有可能導(dǎo)致測定不準(zhǔn)確。
• 待測蛋白和蛋白標(biāo)準(zhǔn)加入雙縮脲試劑后，如果發(fā)現(xiàn)檢測效果不佳，可以室溫放置1h或60℃放置15min，顏色會隨著時間的延長不斷加深。顯色反應(yīng)也會隨溫度升高而加快。如果濃度較低，可以適當(dāng)延長孵育時間或在較高溫度下孵育。

• 測定標(biāo)準(zhǔn)曲線時發(fā)現(xiàn)隨著標(biāo)準(zhǔn)品濃度的增加吸光度或顏色沒有明顯發(fā)化，可能的原因是樣品中含有銅離子螯合劑。
• 建議每次測定時都做標(biāo)準(zhǔn)曲線。因為顏色會隨著時間的延長不斷加深，并且顯色反應(yīng)的速度和溫度有關(guān)，所以除非精確控制顯色反應(yīng)的時間和溫度，否則如需精確測定宜每次都做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
• 如果沒有酶標(biāo)儀，也可以使用普通的分光光度計測定，但應(yīng)考慮根據(jù)比色皿的最小檢測體積。應(yīng)按比例適當(dāng)加大雙縮脲試劑的用量使總體積不小于最小檢測體積，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的用量亦相應(yīng)按比例放大。使用分光光度計測定蛋白濃度時，每個試劑盒可以測定的樣品數(shù)量可能會顯著減少。
• 檢測中出現(xiàn)所有孔都呈暗紫色，可能原因是樣品含有還原劑，應(yīng)適當(dāng)透析或稀釋樣品。
• 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

有效期：12個月有效。