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紫外法蛋白定量試劑盒

產(chǎn)品貨號：15228

產(chǎn)品規(guī)格：250T/500T

產(chǎn)品簡介：

蛋白質(zhì)分子中存在含有共軛雙鍵的酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸，使蛋白質(zhì)在270～290nm波長范圍內(nèi)具有吸收紫外光的性質(zhì)，其中酪氨酸的最大吸收峰為275nm，色氨酸的最大吸收峰為280nm，苯丙氨酸的最大吸收峰為

257nm。在上述波長范圍內(nèi)，蛋白質(zhì)溶液的吸收值與其濃度呈正比，可作定量測定。

尚寶生物紫外法蛋白定量試劑盒優(yōu)點是：操作迅速、簡便，不易受低濃度鹽類的干擾；缺點是與標(biāo)準(zhǔn)蛋白中

酪氨酸、色氨酸含量差異較大的蛋白質(zhì)，準(zhǔn)確性較差。樣品中含有嘌呤、嘧啶及核酸會干擾檢測結(jié)果。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1. 分光光度計或酶標(biāo)儀

2. 96孔板或離心管

操作步驟( 僅供參考) ：

1. 用去離子水或蒸餾水稀釋蛋白稀釋液(10×)至1×，即為蛋白稀釋工作液。取1支20mg的蛋白標(biāo)準(zhǔn)，加入20ml蛋白稀釋工作液，即配制成蛋白標(biāo)準(zhǔn)(1mg/ml)，-20℃保存。

2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線法：取若干試管或96孔板，如下操作以分光光度法為例。選用1cm的石英比色皿，在280nm處以第1管作為調(diào)零點，分別檢測各管吸光度，以A280為縱坐標(biāo)，以蛋白質(zhì)濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

取1ml待測蛋白加至3ml的蛋白稀釋工作液中，混勻，分光光度計或酶標(biāo)儀測定A₂₈₀。

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出樣品的蛋白濃度。

3. Lowry-Kalckar法(又稱280nm和260nm吸收差法)：對于含有核酸的蛋白質(zhì)，無需制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。以蛋白稀釋工作液作為調(diào)零點，取1ml待測蛋白加至3ml的蛋白稀釋工作液中，混勻，分光光度計或酶標(biāo)儀測定A₂₈₀和A₂₆₀。根據(jù)經(jīng)驗公式計算出待測樣品的蛋白濃度，如果蛋白濃度過高應(yīng)用蛋白稀釋工作液稀釋后再行檢測。

蛋白質(zhì)濃度(g/L)=1.45×A₂₈₀ -0.74× A₂₈₀

4. Waddell法(又稱215nm和225nm吸收差法)：對于蛋白質(zhì)含量較少的溶液，適用于該法。取若干試管或96孔板，如下操作以分光光度法為例。以蛋白稀釋工作液作為調(diào)零點，取1ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)(1mg/ml)加至3ml的蛋白稀釋工作液中，混勻，分光光度計或酶標(biāo)儀測定A₂₁₅和A₂₂₅。以215nm與225nm吸光度值之差(D=A₂₁₅-A₂₂₅)為縱坐標(biāo)，以蛋白濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，再測出未知樣品的吸收差，即可由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出未知樣品的蛋白質(zhì)濃度。或者不用制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，直接按照如下經(jīng)驗公式計算：

蛋白質(zhì)濃度(g/L)=144×(A₂₁₅-A₂₂₅)。

注意事項：

1. 蛋白標(biāo)準(zhǔn)(BSA)粉末溶解于蛋白稀釋工作液，該液中含有防腐劑，不影響后續(xù)檢測，該蛋白標(biāo)準(zhǔn)液-20℃保存。

2. 待測蛋白溶解于什么樣的稀釋液中，蛋白標(biāo)準(zhǔn)也宜溶解于什么樣的稀釋液中，否者待測蛋白與蛋白標(biāo)準(zhǔn)中所含非蛋白成分不一致，有可能導(dǎo)致測定不準(zhǔn)確。

3. 如果沒有分光光度計，也可以使用酶標(biāo)儀測定，但應(yīng)考慮根據(jù)比色皿的最小檢測體積。

4. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

有效期：12個月有效。蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制成溶液后應(yīng)-20℃凍存。