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讓專業(yè)人士告訴你純化磁珠的試驗(yàn)操作步驟
純化磁珠適合于從各種PCR產(chǎn)物或酶促反應(yīng)液中高通量快速地回收100bp~50kb的DNA/RNA的片段，回收效率高達(dá)80%。能有效地去除PCR產(chǎn)物或酶促反應(yīng)液中的寡聚核甘酸、引物二聚體、鹽、蛋白質(zhì)等污染。
純化磁珠的操作步驟：
自備試劑：
洗滌液：85%乙醇；
洗脫液：BufferEB(10mMTris-HCl，pH8.0)或去離子水(pH在7.0~8.0之間)。
磁力架：(建議使用深圳艾維迪泰生物科技有限公司針對(duì)200μLPCR管磁力架，貨號(hào)：BMB32-0.2)
實(shí)驗(yàn)步驟：
1.充分混合震蕩磁珠，使管內(nèi)磁珠*均勻懸浮起來。
2.向樣品管(可使用200μLPCR管或96孔板)中加入待純化的DNA樣品溶液。
3.取1.8×樣品體積的磁珠溶液加入樣品管中，漩渦震蕩5秒后，室溫靜止結(jié)合5min。
注：放置期間如出現(xiàn)磁珠沉降現(xiàn)象應(yīng)及時(shí)顛倒或者旋窩混勻，以保證磁珠處于懸浮狀態(tài)。
4.將樣品管置于磁力架上2min左右或待磁珠被磁力架裝置*吸附，保持樣品管在磁力架上靜止，用移液槍吸取上清并棄掉，操作過程中避免觸碰到磁珠團(tuán)。
5.保持樣品管在磁力架上，向管內(nèi)慢慢加入300μL85%乙醇，保持樣品管不離開磁力架以及磁珠團(tuán)始終被吸附在管壁上，禁止分散開。
6.將樣品管置于磁力架上2min左右或待磁珠被磁力架*吸附，保持樣品管在磁力架上靜止，用移液槍吸取上清并棄掉，操作過程中避免觸碰到磁珠團(tuán)。
7.重復(fù)步驟5~6，將管內(nèi)的液體全部吸除干凈。
8.將樣品管從磁力架上取出，于室溫放置3~5min，使殘留乙醇充分揮發(fā)。
注：避免真空干燥，磁珠過于干燥將會(huì)降低DNA/RNA洗脫效率。
9.向管內(nèi)加入20~100μL洗脫液，并用移液槍輕輕吹打5-10次，使磁珠重懸混勻，操作過程中應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
10.室溫放置5min以充分洗脫。
注：為了提高洗脫效率，放置期間如出現(xiàn)磁珠沉降現(xiàn)象應(yīng)及時(shí)顛倒或者旋窩混勻，以保證
磁珠處于懸浮狀態(tài)。
11.將洗脫樣品管放回磁力架上2min或待所有磁珠都被磁力架裝置*吸附。
12.小心地將洗脫上清轉(zhuǎn)移到新的滅過菌的管子中，在轉(zhuǎn)移過程不要碰到磁珠，如出現(xiàn)磁珠懸起現(xiàn)象請(qǐng)重復(fù)步驟11~12。