CCRF-CEM（人急性T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞）是由GEFoley等人于1964年11月從一位四歲白人女性急性淋巴細(xì)胞白血病患者的外周血白血球衣中建立的類淋巴母細(xì)胞細(xì)胞株。
一、細(xì)胞基本屬性
細(xì)胞名稱:CCRF-CEM（人急性T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞）
細(xì)胞別稱:CCRF-CEM[CCRF CEM]; CCRF/CEM; CCRFCEM; CCRF.CEM; CCRF CEM; CCRF; CEM; CEM-CCRF; CEM-CCRF (CAMR); CCRF/CEM/O; CEM/0; CEM-0; CCRF-CEM/S; GM03671
細(xì)胞貨號:SNL-051
細(xì)胞種屬:人
生長情況:懸浮
培養(yǎng)條件:1640+10%FBS+1%雙抗
培養(yǎng)環(huán)境:air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%
二、細(xì)胞培養(yǎng)操作
換液周期:2-3天
培養(yǎng)基體積:T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml
傳代比例:1:2-1:4（具體情況視細(xì)胞生長速度及密度決定）
傳代方法:
1.混勻細(xì)胞，收集細(xì)胞培養(yǎng)基，900rpm離心3-5min，棄上清；
2.加新的*培養(yǎng)基輕輕重懸細(xì)胞，均勻分到新的培養(yǎng)瓶里；
3.補(bǔ)足*培養(yǎng)基，將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)；
注意事項(xiàng) 部分懸浮細(xì)胞會(huì)附著瓶底，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)基或者吹打細(xì)胞面就會(huì)脫落，不需要胰酶消化。建議使用培養(yǎng)皿培養(yǎng)，更適合吹打細(xì)胞操作，吹打細(xì)胞注意盡量輕柔，不要產(chǎn)生過多氣泡以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
三、細(xì)胞凍存操作
凍存液配方:92%FBS+8%DMSO(新手推薦)或92%*培養(yǎng)基+8%DMSO(高手推薦);
凍存規(guī)格:200-300萬/ml，1ml每管
凍存方法:
1. 離心獲得細(xì)胞沉淀后，加配置好的凍存液輕輕重懸細(xì)胞；
2. 將細(xì)胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標(biāo)記的凍存管；
3. 將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒，放入-80度冰箱過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存；沒有程序凍存盒的實(shí)驗(yàn)室，加入細(xì)胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存
注意事項(xiàng):凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時(shí)復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性，若有異常，及時(shí)調(diào)整實(shí)驗(yàn)方案
Tips：
1.細(xì)胞懸浮圓形生長，偶有小聚團(tuán)，部分細(xì)胞附著瓶底；
2.圓形透亮、細(xì)胞膜完整的細(xì)胞是活細(xì)胞，如果無法判斷，可以取少量細(xì)胞用臺盼藍(lán)染色后計(jì)數(shù)確定細(xì)胞活率；
3.懸浮細(xì)胞密度維持1E5-5E5/ml之間，密度過低或者過高可能會(huì)影響細(xì)胞狀態(tài)；
我們推薦使用尚恩生物CCRF-CEM（人急性T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞）*培養(yǎng)基（產(chǎn)品貨號：SNLM-051）作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
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