細(xì)胞系特征

細(xì)胞株名稱(chēng)：A549/吉西他濱 人肺癌吉西他濱耐藥株

種屬：人

組織來(lái)源：肺癌

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

形態(tài)特征：上皮細(xì)胞

微生物及支原體檢測(cè)：陰性

細(xì)胞背景：該細(xì)胞系由D.J.Griad通過(guò)肺癌組織移植培養(yǎng)建系，患者為58歲白人男性。 A549能通過(guò)胞苷二磷酸途徑合成含有高含量不飽和脂肪酸的。

安全性：所有腫瘤和病毒轉(zhuǎn)染的細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需高壓滅菌后方能丟棄。

培養(yǎng)條件：

培養(yǎng)基：90%RPMI-1640+10%胎牛血清+100nM吉西他濱

血清我們推薦用:

GIBCOFBS-10099-141或HYCLONEFBS-SH30084.03。

培養(yǎng)條件：37.0C carbon dioxide(CO2),5%

傳代方法：

收到細(xì)胞后，在倒置鏡下(是在4X物鏡)觀察整個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)情況。

（一）如果細(xì)胞未長(zhǎng)滿(mǎn)，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶，吸出培養(yǎng)液，換 10ml新鮮培養(yǎng)液后繼續(xù)培養(yǎng)。

(二)如果細(xì)胞已長(zhǎng)滿(mǎn)，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：

1. 棄去培養(yǎng)液，用PBS（不含鈣,鎂離子）洗1-2次。

2. 加0.7-1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，用力拍打瓶壁，期間每隔 5-10s放到顯微鏡下觀察，直至50-70%的細(xì)胞脫落后，加入2ml 以上培養(yǎng)基中止消化。

3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)瓶中。如果沒(méi)有特別說(shuō)明，收到細(xì)胞后的次傳代一般是一傳二。

注：1、觀察細(xì)胞在低倍鏡（4或5X物鏡)下進(jìn)行，否則不能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度?？醇?xì)胞的形態(tài)請(qǐng)?jiān)?/span>10X或20X物鏡下。

2、瓶中運(yùn)輸培養(yǎng)基不能重復(fù)再用,請(qǐng)換用加雙抗的新培養(yǎng)基，細(xì)胞凍存后,培養(yǎng)基中可不加任何抗生素。

3、有些細(xì)胞貼壁不牢，如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落，可離心吹打后接種到新瓶?jī)?nèi)。

4、收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)及時(shí)與我們聯(lián)系。..

凍存方法：

凍存液：90%胎牛血清，10%DMSO

儲(chǔ)存：液氮儲(chǔ)存