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一、永生化人腎上皮細(xì)胞簡(jiǎn)介：雖然原代人腎上皮細(xì)胞最更能真實(shí)地反映腎上皮細(xì)胞在人體內(nèi)的生理狀態(tài)，但是一方面人腎組織非常珍貴，原代分離培養(yǎng)人腎上皮細(xì)胞周期長及對(duì)技術(shù)人員經(jīng)驗(yàn)要求較高，另一方面此原代細(xì)胞生長較慢及在體外不能傳代，這些不利因素制約了原代人腎上皮細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)室的廣泛應(yīng)用

一、永生化人腎上皮細(xì)胞簡(jiǎn)介：

雖然原代人腎上皮細(xì)胞最更能真實(shí)地反映腎上皮細(xì)胞在人體內(nèi)的生理狀態(tài)，但是一方面人腎組織非常珍貴，原代分離培養(yǎng)人腎上皮細(xì)胞周期長及對(duì)技術(shù)人員經(jīng)驗(yàn)要求較高，另一方面此原代細(xì)胞生長較慢及在體外不能傳代，這些不利因素制約了原代人腎上皮細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)室的廣泛應(yīng)用。我公司的研究團(tuán)隊(duì)擁有多年原代細(xì)胞分離培養(yǎng)及細(xì)胞永生化服務(wù)研究經(jīng)驗(yàn)，成功建立了永生化人腎上皮細(xì)胞。
腎小管上皮細(xì)胞對(duì)腎功能的發(fā)揮起著重要作用。它們幾乎能重吸小球?yàn)V過液中所有的葡萄糖和氨基酸，并使其它非營養(yǎng)物質(zhì)排泄到尿液中。腎小管上皮細(xì)胞能產(chǎn)生包括細(xì)胞因子和趨化因子在內(nèi)的炎性介質(zhì)，并通過產(chǎn)生IL-8從而影響和指導(dǎo)白細(xì)胞的分化來積極參與急性炎癥過程。在腎臟移植后或新月體腎炎的炎癥過程中，腎小管上皮細(xì)胞表達(dá)IL-2 α受體和II類MHC抗原，這表明它們參與腎臟免疫系統(tǒng)損傷的發(fā)病機(jī)理。
腎小球是，腎小球毛細(xì)血管壁構(gòu)成過濾膜。腎小球外層為上皮細(xì)胞層上皮細(xì)胞又稱足細(xì)胞，其不規(guī)則突起稱足突，其間有許多狹小間隙，血液經(jīng)濾膜過濾后，濾液入腎小球囊。在正常情況下，血液中絕大部分蛋白質(zhì)不能濾過而保留于血液中，僅小分子物質(zhì)如尿素、葡萄糖、電解質(zhì)及某些小分子蛋白能濾過。
本公司生產(chǎn)的永生化人腎上皮細(xì)胞采用酶解法和基因轉(zhuǎn)染制備而來，細(xì)胞總量約為1×10⁶/T25方瓶，細(xì)胞純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
二、使用方法

1 、您收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作：
取出 T25 方瓶， 75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，放入 37℃ , 5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置 2-3 小時(shí)，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)，然后打開瓶子回收瓶子中培養(yǎng)液作為后續(xù)培養(yǎng)此細(xì)胞的培養(yǎng)液（備注：先使用瓶子中培養(yǎng)液培養(yǎng)及盡快凍存保種細(xì)胞，保存種子后再嘗試自己完全培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察是否適合此細(xì)胞生長，以免使用自己培養(yǎng)液不適合細(xì)胞生長造成細(xì)胞狀態(tài)不好或死亡） ，最后按照后面細(xì)胞傳代步驟進(jìn)行細(xì)胞傳代培養(yǎng)。
2 、細(xì)胞傳代：
1）細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 90%面積時(shí)，棄 T25 方瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細(xì)胞 3 次；
2）添加 0.25%消化液約 2ml 至培養(yǎng)瓶中 37 度培養(yǎng)箱放置 3-5 分鐘，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞基本脫落后加入培養(yǎng)基終止消化，用滴管混勻并將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm/min，離心 5min；
3）棄上清，沉淀細(xì)胞用 10ml 培養(yǎng)基重懸，然后按 1:2 比例進(jìn)行分瓶傳代，最后放入 37℃ ,5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4）待細(xì)胞貼壁后，觀察培養(yǎng)結(jié)果，之后進(jìn)行換液培養(yǎng)或傳代。
3 、細(xì)胞凍存：
1）細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 90%面積時(shí)，棄 T25 方瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細(xì)胞 3 次；
2）添加 0.25%消化液約 2ml 至培養(yǎng)瓶中 37 度培養(yǎng)箱放置 3-5 分鐘，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞基本脫落后加入培養(yǎng)基終止消化，用滴管混勻并將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm/min，離心 5min；
3）用適當(dāng)量的凍存液（培養(yǎng)液： FBS：DMSO=7:2:1）重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；
4）先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1h，然后將其移入-80℃過夜， 24h 后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長期儲(chǔ)存（或者按照梯度程序降溫模式直接放置-80 度凍存后并轉(zhuǎn)移液氮中長期儲(chǔ)存）。
4、細(xì)胞復(fù)蘇：
1）從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2）將凍存管中的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至含 5ml 培養(yǎng)液無菌離心管中，1000rpm 離心 5min ，然后加入 5ml 完全培養(yǎng)液混勻細(xì)胞，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至 T25 培養(yǎng)瓶中，放置于 37℃ , 5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
3）第二天，換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

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