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PriCells: 小鼠單個核細(xì)胞分離去除脾臟細(xì)胞懸液中的紅細(xì)胞

時間:2021-9-22 閱讀:472
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PriCells: 小鼠單個核細(xì)胞分離去除脾臟細(xì)胞懸液中的紅細(xì)胞
 
脾臟細(xì)胞懸液在進行淋巴細(xì)胞計數(shù)之前最好先去除紅細(xì)胞(RBC)。胸腺和淋巴結(jié)細(xì)胞懸液則不必去除紅細(xì)胞。脾臟細(xì)胞的亞群分離也需先去除紅細(xì)胞。
 
附加材料:
ACK裂解緩沖液
 
實驗方案:
1.  每個脾臟用約5ml裂解緩沖液懸浮脾臟細(xì)胞;一個12ml試管可用于裂解一個或兩個脾臟,也可以用50ml離心管裂解更多的脾臟。
2.  室溫孵育5min,間以搖動。
3.  加入洗液直至裝滿容器,以低速離心機上以200g離心10min后棄上清。再洗沉淀一次并以適量培養(yǎng)基重懸以便下一步操作(如去除死細(xì)胞、細(xì)胞計數(shù)或者細(xì)胞分離)。
 
附錄:ACK裂解緩沖液
      8.29g  NH4Cl(0.15mol/L)
      1g     KH2CO3(10.0mmol/L)
      37.2mg Na2EDTA(0.1mmol/L)
      加800ml水,用1mol/L鹽酸調(diào)PH至7.2~7.4
      補加水至1L
      0.2μm濾膜過濾除菌
      室溫保存


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