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武漢原生原代生物醫(yī)藥科技有限公司

PriCells: 正常晶狀體上皮細(xì)胞原代培養(yǎng)

時間:2021-10-13 閱讀:249
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PriCells: 正常晶狀體上皮細(xì)胞原代培養(yǎng)
 
實驗材料:
1. 材料來源:人眼、兔眼或者豬眼等;
2. 清洗液:不含Ca2+和Mg2+的1×PBS,添加100IU/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素,pH7.2;
3. 器械:無齒顯微小鑷子2把、培養(yǎng)板和培養(yǎng)皿若干;
4. 培養(yǎng)液:為含15%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液;
 
實驗方法:
1. 取材
1)摘取動物或人的供體眼球,作常規(guī)消毒處理;
2)用刀片沿角鞏膜緣環(huán)形剪開眼球,除去角膜和虹膜,并用角膜剪刀剪斷晶狀體懸韌帶,取出晶狀體,置于培養(yǎng)皿中;
3)用PBS液洗去黏附在晶狀體表面的虹膜色素及玻璃體。棄去洗液;、
4)將晶狀體的凸面向下,用4號針頭于晶狀體赤道部稍靠后的部位環(huán)刺一圈,然后用兩把無齒顯微鑷子輕輕分離出晶狀體前囊膜;
2. 原代培養(yǎng);
1)取下晶狀體前囊膜后,一般不經(jīng)洗滌。將其剪成余額1.5mm×1.5mm的植塊;
2)用無齒顯微鑷子挑起植塊,平貼于培養(yǎng)板中;
3)置于37℃恒溫箱中約5min,待組織塊稍干后便可加入培養(yǎng)液;
4)按常規(guī)方法培養(yǎng)。每周換培養(yǎng)液2次,每次更換2/3的培養(yǎng)液量;
3. 傳代培養(yǎng):在培養(yǎng)細(xì)胞基本融合形成單層時即需傳代。否則細(xì)胞會因生存空間不足或由于細(xì)胞密度過大而致營養(yǎng)不足。按常規(guī)方法進(jìn)行傳代培養(yǎng);
 
PriCells提供:
1. 各種原代細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基;
2. 各種原代細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑;
3. 原代細(xì)胞分離試劑盒;
4. 原代細(xì)胞鑒定試劑盒;
5. 原代細(xì)胞總蛋白質(zhì)抽提物;
6. 原代細(xì)胞總RNA;
7. 原代細(xì)胞總DNA;

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