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武漢原生原代生物醫(yī)藥科技有限公司

PriCells: 原代細(xì)胞富爾根(Feulgen)反應(yīng)顯示DNA

時(shí)間:2021-10-15 閱讀:512
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PriCells: 原代細(xì)胞富爾根(Feulgen)反應(yīng)顯示DNA
基本原理:
顯示DNA的傳統(tǒng)方法是富爾根(Feulgen)反應(yīng),切片先用稀鹽酸處理,DNA經(jīng)弱酸(1mol/L HCL)水解后,在60℃條件下使DNA分子中脫氧核糖與嘌呤之間的連接打開,脫氧核糖的一端釋放出醛基,并在原位與Schiff試劑反應(yīng)生成紫紅色產(chǎn)物。原理同PAS反應(yīng),使細(xì)胞核DNA顯紫紅色。在此過程中RNA不受影響,故染色具有DNA特異性。準(zhǔn)確的溫度和鹽酸濃度,適宜的水解時(shí)間是成功的關(guān)鍵。水解過度或不足均降低染色強(qiáng)度。
配制試劑:
1.    1mol/L HCL:將8.5ml濃鹽酸和91.5ml蒸餾水混合即得;
2.    0.5%亮綠水溶液;
染色步驟:
1.    取培養(yǎng)于蓋玻片上的貼壁原代細(xì)胞,用Hanks液漂洗三次;
2.    在卡諾(Carnoy)固定液中固定10min,然后蒸餾水洗三次;
3.    移入60℃濃度為1mol/L的HCL中靜置10min;
4.    用蒸餾水漂洗幾次;
5.    放入Schiff試劑中靜置30—60min,可隨時(shí)檢查顯色情況;
6.    用自來水沖洗5min;
7.    再用蒸餾水漂洗;
8.    不同濃度梯度乙醇溶液脫水;
9.    用二甲苯透明、樹膠封片;
結(jié)果:
原代細(xì)胞核內(nèi)DNA顯紫紅色,細(xì)胞質(zhì)呈綠色;



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