本視頻為普諾賽凍存細(xì)胞收貨處理指南，對每一步操作都做了演示，以便實驗者在收到細(xì)胞后，能正確地處理和復(fù)蘇。

凍存細(xì)胞復(fù)蘇實驗準(zhǔn)備：

將15mL離心管、T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶、移液管、電動移液器等物品提前放入生物安全柜中，紫外照射30min消毒滅菌，細(xì)胞*培養(yǎng)基提前30min放至37℃預(yù)熱備用。

凍存細(xì)胞收貨處理步驟

1. 收到細(xì)胞后，檢查外包裝是否完整；

2. 打開外包裝，取出保存于干冰中的細(xì)胞；

3. 檢查凍存管是否有破損，內(nèi)容物是否融化；

4. 將取出的凍存管迅速放入37℃水浴鍋中融化；

5. 凍存管用75%酒精消毒，放入生物安全柜中；

6. 將5ml*培養(yǎng)基加入15ml離心管中備用；

7. 將凍存管中的細(xì)胞懸液加入到準(zhǔn)備好的培養(yǎng)基中，輕輕混勻；

8. 將15mL離心管放入離心機(jī)中離心，1000rpm/min（約200g）離心3-5min；

9. 將5ml*培養(yǎng)基加入到T25培養(yǎng)瓶中備用；

10. 取出離心好的細(xì)胞，酒精消毒后放入安全柜中；

11. 輕輕吸去離心好的細(xì)胞上清；

12. 加入1ml*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞；

13. 將重懸好的細(xì)胞加入到準(zhǔn)備的T25培養(yǎng)瓶中，輕輕混勻；

14. 在顯微鏡下觀察接種的細(xì)胞狀態(tài)及密度；

15. 將培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

注意事項：

1）操作凍存細(xì)胞時應(yīng)使用手套、工作服和防護(hù)面具等，以避免事故的發(fā)生；

2）復(fù)蘇細(xì)胞時，應(yīng)保持管蓋擰緊，將管蓋以下部分浸入37℃水浴中解凍，解凍過程要快；

3）部分比較脆弱的細(xì)胞可不用離心，直接用培養(yǎng)基稀釋細(xì)胞懸液后進(jìn)行培養(yǎng)，但要及時通過換液等方式除去含DMSO的細(xì)胞凍存液；

4）請參照細(xì)胞說明書推薦的培養(yǎng)基和操作方法來培養(yǎng)細(xì)胞。