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深圳市安培生物科技有限公司

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血清系列: SERANA胎牛血清低內(nèi)毒素膠原蛋白 ZETA LIFE胎牛血清

細胞轉(zhuǎn)染: 活體轉(zhuǎn)染試劑 LIPO3000轉(zhuǎn)染試劑高效轉(zhuǎn)染試劑

支原體清除: 支原體去除試劑

細胞凍存: 無血清細胞凍存液

實驗耗材: 多功能開關(guān)器封板膜 PCR & qPCR 孔板 qPCR耗材 PCR耗材

分子試劑: RNA提取等溫擴增克隆突變 PCR系列核酸提取純化核酸染料

細胞增殖與凋亡: 細胞凋亡檢測試劑盒細胞增殖及毒性檢測

Biozellen系列: 鼠尾膠原蛋白 3D基質(zhì)膠

培養(yǎng)基: 內(nèi)皮細胞培養(yǎng)基細胞添加劑無血清培養(yǎng)基

ELISA試劑盒: 豬ELISA試劑盒小鼠ELISA試劑盒

TOYOBO（東洋紡）: PCR相關(guān)試劑

ZYMO RESEARCH: 試劑盒

Greiner（格瑞納）: 細胞培養(yǎng)小室

IKA（艾卡）: 刀頭

化學(xué)發(fā)光底物（ECL）: ECL化學(xué)發(fā)光液

PROSPEC系列: 單胺氧化酶

Epigentek系列: 細胞分析試劑盒

微生物檢測: 生化鑒定試劑盒

細胞生物學(xué): 細胞輔助試劑細胞檢測試劑

Corning康寧: 凍存管嵌套/小室

解離試劑: 胰蛋白酶

細胞類-實驗耗材: 細胞培養(yǎng)瓶細胞培養(yǎng)皿細胞培養(yǎng)板

原代細胞: 小鼠原代細胞

植物檢測系列試劑盒: 植物激素系列植物氧化與抗氧化系列植物氮代謝系列植物脂肪酸代謝系列植物固氮作用系列植物呼吸作用系列植物光合作用檢測試劑盒

SERANA: BSA

細胞系: 人源細胞系

生化試劑盒

環(huán)境檢測系列試劑盒（AKEN）: 土壤氧化還原酶系列

類器官培養(yǎng): 培養(yǎng)試劑盒

緩沖器和解決方案: 抗生素培養(yǎng)添加物隱窩增強劑保護液洗滌液凍存液解離液

生物三凝膠基質(zhì): 細胞外基質(zhì)

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生物樣本庫: 類器官

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修飾檢測試劑盒: 蛋白修飾檢測試劑盒

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實時熒光定量PCR的優(yōu)化（一）

時間：2021/10/12閱讀：2358

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如果是病毒定量和SNP基因分型的實時熒光定量PCR，我們需要盡可能高特異性；如果是病原體、mRNA檢測，我們需要高靈敏度。

想要提高PCR擴增效率、特異性及靈敏度，我們可以通過一系列措施優(yōu)化實時熒光定量PCR實驗。首先是靶序列的選擇。

1、選擇的靶序列合適長度在50～150bp之間。較短的序列合成耗時短，擴增時間縮短，因此污染DNA被擴增的可能性降低。

2、選擇靶序列時，使用BLAST檢索分析靶序列是否存在多態(tài)性和測序錯誤，并避開。如果靶序列中出現(xiàn)重復(fù)序列，會降低PCR檢測靈敏度，也應(yīng)該避開。

3、控制靶序列中GC含量≤60%。高GC含量，會影響靶序列在熱循環(huán)中的變性，也容易產(chǎn)生非特異性擴增。

4、避免產(chǎn)生二級結(jié)構(gòu)。靶序列如果有反向重復(fù)的序列，容易產(chǎn)生二級結(jié)構(gòu)，影響引物、探針的雜交。

除此以外，我們還需要保證模板的質(zhì)量不會影響擴增，實時熒光PCR的結(jié)果才有可靠性。例如損傷的DNA在PCR中不能充分擴增，或者根本不能擴增。同時，如果模板中存在抑制DNA聚合酶的試劑（DMSO等）和污染物（SDS等），也會影響PCR的可靠性。

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