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深圳市安培生物科技有限公司

中級(jí)會(huì)員 | 第5年

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當(dāng)前位置：深圳市安培生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>免疫熒光技術(shù)-間接法

產(chǎn)品分類(lèi)品牌分類(lèi)

血清系列: SERANA胎牛血清低內(nèi)毒素膠原蛋白 ZETA LIFE胎牛血清

細(xì)胞轉(zhuǎn)染: 活體轉(zhuǎn)染試劑 LIPO3000轉(zhuǎn)染試劑高效轉(zhuǎn)染試劑

支原體清除: 支原體去除試劑

細(xì)胞凍存: 無(wú)血清細(xì)胞凍存液

實(shí)驗(yàn)耗材: 多功能開(kāi)關(guān)器封板膜 PCR & qPCR 孔板 qPCR耗材 PCR耗材

分子試劑: RNA提取等溫?cái)U(kuò)增克隆突變 PCR系列核酸提取純化核酸染料

細(xì)胞增殖與凋亡: 細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒細(xì)胞增殖及毒性檢測(cè)

Biozellen系列: 鼠尾膠原蛋白 3D基質(zhì)膠

培養(yǎng)基: 內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基細(xì)胞添加劑無(wú)血清培養(yǎng)基

ELISA試劑盒: 豬ELISA試劑盒小鼠ELISA試劑盒

TOYOBO（東洋紡）: PCR相關(guān)試劑

ZYMO RESEARCH: 試劑盒

Greiner（格瑞納）: 細(xì)胞培養(yǎng)小室

IKA（艾卡）: 刀頭

化學(xué)發(fā)光底物（ECL）: ECL化學(xué)發(fā)光液

PROSPEC系列: 單胺氧化酶

Epigentek系列: 細(xì)胞分析試劑盒

微生物檢測(cè): 生化鑒定試劑盒

細(xì)胞生物學(xué): 細(xì)胞輔助試劑細(xì)胞檢測(cè)試劑

Corning康寧: 凍存管嵌套/小室

解離試劑: 胰蛋白酶

細(xì)胞類(lèi)-實(shí)驗(yàn)耗材: 細(xì)胞培養(yǎng)瓶細(xì)胞培養(yǎng)皿細(xì)胞培養(yǎng)板

原代細(xì)胞: 小鼠原代細(xì)胞

植物檢測(cè)系列試劑盒: 植物激素系列植物氧化與抗氧化系列植物氮代謝系列植物脂肪酸代謝系列植物固氮作用系列植物呼吸作用系列植物光合作用檢測(cè)試劑盒

SERANA: BSA

細(xì)胞系: 人源細(xì)胞系

生化試劑盒

環(huán)境檢測(cè)系列試劑盒（AKEN）: 土壤氧化還原酶系列

類(lèi)器官培養(yǎng): 培養(yǎng)試劑盒

緩沖器和解決方案: 抗生素培養(yǎng)添加物隱窩增強(qiáng)劑保護(hù)液洗滌液凍存液解離液

生物三凝膠基質(zhì): 細(xì)胞外基質(zhì)

細(xì)胞因子分子: 抑制劑激動(dòng)劑

生物樣本庫(kù): 類(lèi)器官

蛋白研究系列: 蛋白緩沖 ALP發(fā)光液 ECL系列轉(zhuǎn)印膜轉(zhuǎn)膜封閉 PAGE凝膠試劑盒蛋白電泳蛋白制備免疫檢測(cè)

修飾檢測(cè)試劑盒: 蛋白修飾檢測(cè)試劑盒

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免疫熒光技術(shù)-間接法

時(shí)間：2021/10/26閱讀：1996

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材料與儀器：

抗體
PBS 伊文氏蘭
顯微鏡

實(shí)驗(yàn)步驟：

1. 標(biāo)本固定后，PBS洗滌3x3 分鐘；

2. 滴加一抗，37 ℃40 分鐘或4 ℃過(guò)夜；

3. PBS洗3x3 分鐘；

4. 滴加熒光標(biāo)記二抗37 ℃，40 分鐘；

5. PBS洗3x3 分鐘；

6. 0.1 %伊文氏蘭復(fù)染；

7. PBS洗3x3 分鐘；

8. 緩沖甘油封片，鏡檢。

要點(diǎn)：

1.種屬在進(jìn)行雙重免疫標(biāo)記時(shí)，要選擇來(lái)源于兩種不同種屬動(dòng)物的一抗，如選擇來(lái)源于rabbit和mouse的抗體，二抗則用帶有不同熒光素標(biāo)記的，如抗rabbit或抗mouse二抗， FITC和Tex-Red;

2.孵育時(shí)間和溫度相同的兩種一抗可以同時(shí)孵育，然后加入相對(duì)應(yīng)的一抗的二抗進(jìn)行孵育，一抗孵育時(shí)間室溫至少需要16h,二抗孵育室溫不宜超過(guò)4h,選擇4℃孵育比較好，背景比較清晰，另外孵育時(shí)夏天特別注意室溫溫度；

3.抗體稀釋液通常第一抗體選擇1%牛血清白蛋白進(jìn)行稀釋?zhuān)诙贵w選擇用0.01mol/L的PBS稀釋。



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