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Thp-1細胞高效率轉(zhuǎn)染條件分享
一、轉(zhuǎn)染材料準備
1. 轉(zhuǎn)染試劑用量：10ul
2. siRNA濃度：20um/L
3. 細胞密度：1*106-1*105
4. 轉(zhuǎn)染用培養(yǎng)板：6孔板
5. 轉(zhuǎn)染試劑：Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑；貨號：AD600150
6. 轉(zhuǎn)染時間：48小時
7. 細胞培養(yǎng)胎牛血清：Z7180FBS-500超低內(nèi)毒素胎牛血清
8. 細胞凍存液：L0100無血清細胞凍存液.
注意：本細胞轉(zhuǎn)染用量條件不適合lipo使用。
二、操作過程：
1.提前1天接種細胞：細胞匯合度在60-80%左右，再進行轉(zhuǎn)染。
2. 核酸復(fù)合物制備：將核酸與轉(zhuǎn)染試劑按照比例關(guān)系直接混合，用移液器吹打、混勻，室溫靜止15分鐘。
3.在細胞培養(yǎng)基中加入核酸復(fù)合物：根據(jù)參考用量在細胞中加入核酸復(fù)合物，并輕輕混勻；細胞培養(yǎng)基里面可以含有血清。
4.細胞換液：轉(zhuǎn)染24小時后對細胞進行正常換液，懸浮細胞轉(zhuǎn)染過程中不用換液。
5.分析結(jié)果：質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染48-72小時后熒光檢測轉(zhuǎn)染效率，48-96小時檢測mRNA或蛋白表達。若進行穩(wěn)定表達細胞株的篩選，則在轉(zhuǎn)染后24-48小時左右加入適量的藥物進行篩選。siRNA轉(zhuǎn)染后9小時熒光檢測轉(zhuǎn)染效率，48-72小時檢測mRNA或蛋白表達。
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