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深圳市安培生物科技有限公司
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大鼠星型膠質(zhì)細胞培養(yǎng)實驗——胰酶消化法

時間:2021/12/5閱讀:1458
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材料與儀器

SD大鼠
苯巴(匕匕)妥 解剖液 胰蛋白酶 Dnase DM培養(yǎng)液
離心管 培養(yǎng)箱 手術(shù)器材

步驟

一、 取14.5d SD大鼠一只。

二、 苯巴(匕匕)妥0.5 ml 腹腔注射,待麻醉后置于手術(shù)臺上,酒精棉球消毒皮膚,開腹取出子宮(約12-14個),放入解剖液中,剖開子宮,取出胚胎,放入解剖液中,在耳眼之間離斷,取頭側(cè)部組織,去除腦膜組織,取原始中腦區(qū)組織,放入離心管裝的解剖液中,待全部取出后,1500轉(zhuǎn)2分鐘。

三、 用吸管吸出上清液,在組織細胞沉淀中加入胰蛋白酶一管(1 ml/vial),室溫30分鐘,1500轉(zhuǎn),離心5分鐘(離心前可加入解剖液以終止胰酶作用)。

四、吸去上清,在組織細胞沉淀中加入Dnase 一管(2 ml/vial),37℃反應(yīng)10分鐘,1500轉(zhuǎn),離心5分鐘,吸去上清,在組織細胞沉淀中加入2 ml DM培養(yǎng)液吹打,計數(shù)(計數(shù)公式為(N1+N2+N3+N4)/4x104),以3x105個/瓶在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),做好標(biāo)記(時間、原代的還是第幾代傳代,姓名,細胞名稱等),放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。


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