1 概述

除了差速離心，實(shí)驗(yàn)室中分離生物材料還有密度梯度離心法。

此法又可以分為速率區(qū)帶離心和等密度離心，都需要制備梯度材料，將待分離物加入梯度材料后通過(guò)一定離心力將不同生物顆粒分配到梯度中某些特定位置上，形成不同區(qū)帶。

• 速率區(qū)帶離心：僅能分離沉降系數(shù)差≤20%的顆粒或分子量相差能達(dá)到3倍的蛋白質(zhì)。此法與顆粒密度無(wú)關(guān)。適用于分離密度相同而大小不同的物質(zhì)。

• 等密度離心：此法通過(guò)梯度介質(zhì)產(chǎn)生能夠覆蓋待分離物質(zhì)密度范圍的密度梯度，通過(guò)離心使不同密度的顆粒懸浮到相應(yīng)的介質(zhì)密度區(qū)。顆粒的密度是影響最終位置的僅有因素，只要被分離顆粒間的密度差異大于1%就可用此法分離。適用于分離大小接近而密度差異較大的物質(zhì)。

因此我們可以發(fā)現(xiàn)，用來(lái)形成梯度的材料（介質(zhì)）是離心成功的關(guān)鍵因素。以下將介紹如何選擇梯度材料。

2 梯度材料的選擇原則

理想的梯度材料最好能對(duì)以下幾點(diǎn)優(yōu)勢(shì)進(jìn)行一個(gè)我全都要，但這是不可能的，只能根據(jù)實(shí)驗(yàn)的目的、被分離材料和實(shí)驗(yàn)室條件等進(jìn)行取舍：

• 是惰性材料，與被分離的生物材料不發(fā)生反應(yīng)，且易與所分離的生物粒子分開；

• 可達(dá)到要求的密度范圍，且在所要求的密度范圍內(nèi)具有較低的黏度和滲透壓，離子強(qiáng)度和pH變化較??；
  

• 無(wú)毒，不會(huì)腐蝕離心設(shè)備；
  

• 容易純化、價(jià)格便宜或容易回收；
  

• 濃度便于實(shí)驗(yàn)室內(nèi)測(cè)定，如具有折光率；
  

• 其物理性質(zhì)、熱力學(xué)性質(zhì)應(yīng)該是已知的，穩(wěn)定而不會(huì)因離心的條件與過(guò)程發(fā)生變化。

  
  

常見梯度材料參考

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