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科曉(北京)科技有限公司

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要想操作好超高效液相色譜離不開以下流程!

閱讀:1220      發(fā)布時間:2024-8-20
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  超高效液相色譜作為一種先進的分析技術,具有高分辨率、高靈敏度和高效率的特點,在各個領域中發(fā)揮著重要的作用。通過自動控制純溶劑或濃溶液的比例來在線配制所需要的流動相,極大地縮短了準備實驗所需要的時間。它可讓您充分利用ACQUITY UPLC H-Class系統(tǒng)四元混合能力的優(yōu)勢,同時還能管理所選流動相的理想pH和離子強度要求。
  超高效液相色譜操作流程的詳細介紹:
  1、樣品制備
  樣本轉換:將固體樣本轉換為液體形式,簡化復雜混合物,去除干擾基質,濃縮或稀釋。
  處理方法:包括離心、過濾、蛋白沉淀、液-液萃取、固相萃取、免疫親和捕獲、蛋白質消化和衍生化等多種方法。例如,過濾可以去除樣本中的顆粒,延長色譜柱的使用壽命。
  2、流動相準備
  溶劑純化:使用的溶劑必須為色譜純,并經過0.45μm膜過濾。緩沖鹽等可以是分析純或優(yōu)級純。
  脫氣處理:溶劑及樣品使用前需超聲脫氣30分鐘,以避免氣泡影響分離效果。
  3、系統(tǒng)設置
  硬件檢查:確保色譜系統(tǒng)的各連接部位密封良好,無泄漏現象。檢查并維護泵、進樣器、色譜柱和檢測器等關鍵部件。
  系統(tǒng)預熱:開啟設備,預熱并穩(wěn)定系統(tǒng),以確保分析過程中溫度恒定。
  4、方法開發(fā)
  方法選擇:如果已有現成的分析方法,可以直接使用;如果沒有,需要通過篩選各種色譜柱和洗脫液條件來開發(fā)新方法。
  優(yōu)化與驗證:對選定的方法進行優(yōu)化,并進行穩(wěn)健性測試和方法驗證,確保方法的可靠性和重現性。
  5、數據分析
  數據采集:通過檢測器測量從色譜柱洗脫的分析物信號,并利用色譜數據系統(tǒng)進行轉換,生成色譜圖。
  結果分析:根據色譜圖的保留時間、峰面積等參數進行分析和定量,必要時進行標準曲線校正。

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