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如何選擇合適的內(nèi)參抗體?

時(shí)間:2021/9/16閱讀:3652
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如何選擇合適的內(nèi)參抗體?


Tips:在選擇內(nèi)參抗體時(shí),我們需要遵循幾個(gè)原則:

1.種屬來(lái)源
哺乳動(dòng)物的樣本需要選擇哺乳動(dòng)物中穩(wěn)定表達(dá)的蛋白作為內(nèi)參,同樣的,植物樣本需要選擇植物中穩(wěn)定表達(dá)的蛋白作為內(nèi)參。


2. 細(xì)胞定位
靶標(biāo)蛋白的細(xì)胞定位不同,適合的內(nèi)參也不同。如全細(xì)胞裂解液可選擇beta-actin、beta-tubulin等,膜蛋白一般選擇Na K ATPase,核蛋白則選擇Lamin B1、Histone H3等。

內(nèi)參.png

3. 分子量
內(nèi)參蛋白的分子量需要與目標(biāo)蛋白的分子量有所區(qū)別,否則兩者條帶無(wú)法分開(kāi)。一般目的蛋白與內(nèi)參蛋白大小至少相差5K Da以上。


4. 表達(dá)因素
內(nèi)參選擇還需要考慮實(shí)際的實(shí)驗(yàn)環(huán)境。GAPDH是代謝類(lèi)蛋白,在活組織中表達(dá)較穩(wěn)定。beta-actin和beta-tubulin是結(jié)構(gòu)蛋白,不同組織的細(xì)胞結(jié)構(gòu)會(huì)有差異性。


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