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DNA pull down實驗技術(shù)

時間:2021/9/23閱讀:3630
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DNA pull down實驗技術(shù)

1. 實驗原理

DNA pull down體外研究DNA與蛋白互作的有力工具。該技術(shù)將生物素標記的DNA 片段結(jié)合在鏈霉親和素磁珠上,再與細胞核蛋白孵育,純化出與DNA 片段互作的蛋白,洗滌洗脫得到的蛋白產(chǎn)物,做Western blot檢測特定蛋白是否與靶DNA 片段結(jié)合;做質(zhì)譜鑒定即可篩選出與DNA 片段可能互作的蛋白信息(如:轉(zhuǎn)錄因子、組蛋白等)。

生物素與鏈霉親和素間的作用是目前已知強度最高的非共價作用;其中活化生物素可以在蛋白質(zhì)交聯(lián)劑的介導下,與已知的幾乎所有生物大分子偶聯(lián)。因此用生物素標記核酸后,可以純化出與該核酸結(jié)合的各種生物大分子復合物。

DNA pull-down.png

2. 實驗流程

DNA pull down.png

1)探針設(shè)計及標記:針對靶標區(qū)域設(shè)計特異性DNA探針,探針經(jīng)過脫硫生物素標記,跟偶聯(lián)在磁珠上的鏈霉親和素結(jié)合;

2)Pull down:細胞核提取物與磁珠-DNA探針孵育,靶DNA可以和DNA探針特異性結(jié)合,純化出與靶DNA 片段結(jié)合的蛋白復合體,經(jīng)過洗滌可以將非特異性結(jié)合蛋白質(zhì)去除;最后,洗脫得到與靶DNA結(jié)合的蛋白質(zhì)復合物;

3)互作蛋白質(zhì)鑒定:再經(jīng)過Western Blot或質(zhì)譜(MS)鑒定蛋白質(zhì)。

3. 技術(shù)服務(wù)

1)DNA探針的設(shè)計與合成;

2)細胞培養(yǎng)與核蛋白提??;

3)Pull down捕獲互作蛋白;

4)Western blot驗證;

4)MS鑒定可能的互作蛋白。

4. 交付結(jié)果

1)客觀公正的實驗原始數(shù)據(jù)和分析結(jié)果;

2)提供詳細、完整的實驗報告。


上海昆盟生物科技有限公司 (Coweldgen Scientific Co.,LTD) 是一家專注于生命科學領(lǐng)域提供相關(guān)試劑產(chǎn)品和服務(wù)的生物高科技企業(yè),坐落于上海聚科生物產(chǎn)業(yè)園。公司提供種類齊全的細胞系和多種原代細胞、質(zhì)量穩(wěn)定的細胞培養(yǎng)試劑產(chǎn)品、成熟高效的技術(shù)服務(wù)。本著“守正創(chuàng)新,科學嚴謹"的理念,我們以高標準塑造行業(yè)品牌,以全新視野構(gòu)建現(xiàn)代企業(yè),勇于探索和創(chuàng)新。公司業(yè)務(wù)范圍涉及全國各省市自治區(qū),與國內(nèi)多家醫(yī)院、高校、科研院所、生物科技公司建立了良好的合作關(guān)系,贏得了良好的市場聲譽和廣泛的認可,我們保證將繼續(xù)為廣大科研用戶提供專業(yè)、高效、優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品及服務(wù)!

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