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組織免疫組化(IHC)

實(shí)驗(yàn)方法

1）石蠟切片自37℃恒溫箱過夜烤片后取出，室溫放置5分鐘后，雙蒸水浸泡5分鐘，0.01M PBS（pH7.2-7.4）浸洗5分鐘×3次。

2）加入EDTA緩沖液，微波至沸騰拿出微波爐，自然冷卻至室溫。

3）0.1% triton X-100透膜10分鐘。PBS洗三次。

4）3%過氧化氫（in PBS）RT,15min。重復(fù)此步驟操作1次。

5）用吸水紙擦干組織周圍的玻片，用組化筆畫圈，滴加免疫羊血清封閉30分鐘（室溫）或過夜（4℃）。

6）傾去封閉血清，不用清洗，直接滴加稀釋好的一抗，4℃濕盒過夜。次日取出，傾去一抗，PBS清洗三次。

7）滴加稀釋的二抗，37℃孵育1h。傾去二抗，PBS清洗3遍。

8）加DAB顯色劑，每樣加上100ulDAB,5-20s內(nèi)顯微鏡下觀察有無特異性信號(hào)。顯色后立即用蒸餾水沖洗終止反應(yīng)。如無特異性表達(dá)可適當(dāng)延長DAB顯色時(shí)間。

9）蘇木精染色液復(fù)染，蒸餾水洗2min，蘇木精復(fù)染10s-15min，蒸餾水洗，鹽酸酒精（70%乙醇：鹽酸=99:1）分化20s，蒸餾水洗，稀氨水（1%）反藍(lán)10s。流水沖洗，鏡下觀察。

10）脫水透明，95%乙醇5min，100%乙醇5min，2次（2瓶無水乙醇）.二甲苯Ⅰ10min二甲苯Ⅱ10min。封片，中性樹膠封片。

實(shí)驗(yàn)周期：組織免疫組化（IHC）1-2周，組織免疫熒光（IF）-普通熒光顯微鏡觀察1-2周（≤50個(gè)樣本），組織免疫熒光（IF）-共聚焦熒光顯微鏡3周（≤20個(gè)樣本）。

細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)服務(wù)

v 細(xì)胞傳代培養(yǎng)

v 原代細(xì)胞分離培養(yǎng)

v 細(xì)胞增殖

v 細(xì)胞凋亡

v 細(xì)胞周期

v 細(xì)胞遷移/侵襲

v 細(xì)胞流式分選

v 慢病毒包裝/穩(wěn)轉(zhuǎn)系篩選

v 電生理檢測(cè)

v 定制化細(xì)胞模型

分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)服務(wù)

v 生化檢測(cè)

v HPLC/LC-MS

v 實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）

v 重組載體構(gòu)建

v 甲基化檢測(cè)

v SNP檢測(cè)

v 雙熒光素酶檢測(cè)

v 定點(diǎn)突變

v 原位雜交

v ELISA檢測(cè)

v Western Blot（WB）

v 外泌體分離及鑒定

v Co-IP檢測(cè)

v 凝膠遷移實(shí)驗(yàn)（EMSA）

v RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀（RIP）

v 染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)（ChIP）

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