6
當(dāng)前位置：北京博奧森生物技術(shù)有限公司>>技術(shù)文章>>caspase-3抗體操作簡單，重復(fù)性好，效率高
caspase-3抗體操作簡單，重復(fù)性好，效率高
caspase-3抗體是位于哺乳動物細(xì)胞凋亡通路下游關(guān)鍵的死亡蛋白酶。正常情況下，胞質(zhì)中的Caspase-3以無活性的酶原形存在，細(xì)胞凋亡信號的出現(xiàn)可導(dǎo)致Caspase-3裂解、活化，活化的Caspase-3又進(jìn)一步導(dǎo)致蛋白酶級聯(lián)切割放大，最終使細(xì)胞走向死亡。
因此Caspase-3表達(dá)量可以直接反映細(xì)胞凋亡程度。細(xì)胞凋亡程度Caspase-3是細(xì)胞凋亡過程中最關(guān)鍵的執(zhí)行分子(keyexecutioner)之一，可以剪切細(xì)胞凋亡過程中的許多關(guān)鍵蛋白，例如PARP。
caspase-3抗體的激活需要從沒有活性的全長Caspase-3(35kD)，在Asp28和Ser29之間及Asp175和Ser176之間進(jìn)行剪切，產(chǎn)生有活性的17kD肽段。Caspase-3抗體可以識別全長的Caspase-3(35kD)，也可以識別Caspase-3被剪切后產(chǎn)生的17kD片斷。未發(fā)現(xiàn)和其它Caspase家族蛋白有交叉反應(yīng)。
Caspase-3抗體可用于制備AnnexinV-FITC細(xì)胞凋亡試劑盒。所述試劑盒包括：0.6-0.8%BSA的PBS緩沖液，2.5-4%多聚甲醛的PBS緩沖液，含0.6-0.8%Triton-X-100和0.06-0.08%吐溫40的PBS緩沖液，兔抗caspase-3抗體，帶有Alexa-Fluor488綠色熒光素標(biāo)記的山羊抗兔IgG二抗，18-22μM-DAPI的PBS緩沖液。
所述兔抗caspase-3抗體是用合成的caspase-3蛋白中靠近Asp175的氨基末端殘基的多肽抗原免疫兔子獲得的多克隆抗體；兔抗caspase-3抗體按1:600的體積比稀釋于封閉液中。所述山羊抗兔IgG二抗按1:600的體積比稀釋于封閉液中；其中，所述封閉液為含10%山羊血清和0.06-0.08%吐溫40的PBS液。上述試劑盒能對凋亡細(xì)胞進(jìn)行準(zhǔn)確定性和定量檢測，靈敏度高、特異性強(qiáng)，操作簡單，重復(fù)性好，效率高。