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• 化合物具有多樣性，大部分的分類(lèi)是人為分類(lèi)。

• 溶劑難以進(jìn)行合理的表征，化合物難以表征

• 雖然前文已經(jīng)用了混料設(shè)計(jì)去篩選溶劑的選擇性，但是不具備普遍性

溶劑參數(shù)化模型

萬(wàn)幸的是，溶劑已經(jīng)可以進(jìn)行參數(shù)化表達(dá)。下面提供了常用的溶劑參數(shù)化表格。根據(jù)該表格大體可以將溶劑分為三類(lèi)，酸性、堿性、以及偶極。這三類(lèi)溶劑的選擇性存在明顯區(qū)別。

1.吸光度：乙腈HPLC吸收最小（特別是在短波長(zhǎng)上?。?。所謂HPLC級(jí)是除去具有吸收UV的雜質(zhì)，在規(guī)定的波長(zhǎng)上吸光度限制在規(guī)格值以內(nèi)。在UV檢測(cè)時(shí)，產(chǎn)生的噪聲小，因此在進(jìn)行UV短波長(zhǎng)上的高靈敏度分析時(shí)乙腈HPLC級(jí)最適宜。另外，在UV檢測(cè)中的梯度基線上也是乙腈HPLC級(jí)產(chǎn)生鬼峰少，雖然，其他與水相溶性高的有機(jī)溶劑有各種各樣，但很難能找到比乙腈HPLC級(jí)吸收更小的。
2.壓力：乙腈低。根據(jù)有機(jī)溶劑的種類(lèi)或混合比率的不同而異,水/乙腈,水/甲醇混合液的比率與輸液壓力的關(guān)系中,甲醇與水混合,壓力增高,而乙腈同樣與水混合且并不如此。所以,乙腈一方,在同樣的流速下不在柱內(nèi)加上多余的壓力。從上述兩項(xiàng),可以確認(rèn)使用乙腈的意義,那么,甲醇除了價(jià)格以外,還有沒(méi)有其化優(yōu)點(diǎn)呢?
3.洗脫能力：一般而言,乙腈較強(qiáng)。乙腈和甲醇分別用同樣的比率與水混合時(shí),一般情況下,乙腈的洗脫能力強(qiáng).特別是混合比率低時(shí),從和苯酚的洗脫來(lái)看,獲得同樣的保留時(shí)間,乙腈的比率,只需甲醇的比率的一半以下即可.另一方面,有機(jī)溶劑*或與此極接近時(shí),從胡蘿卜素和膽甾醇來(lái)看,常常都是甲醇的洗脫能力強(qiáng).混合比在50比1等較為特殊時(shí),調(diào)制的誤差大,影響保留時(shí)間,或平衡化的時(shí)間長(zhǎng),乙腈遇到這種情況時(shí),用甲醇的10比1混合代替乙腈,這樣操作方便些。溶劑受溫度影響時(shí),不采用容器定量,而采用重量的方法(考慮比重),可使混合比的誤差減小。
4.分離(洗脫)的選擇性.兩者的差異：乙腈和甲醇在分離的選擇性上不同。由于有機(jī)溶劑分子的化學(xué)性質(zhì)(甲醇和乙醇是質(zhì)子性,乙腈和四氫呋喃是非質(zhì)子性)不同所致。因此,在用乙腈類(lèi)不能獲得分離的選擇性,就試用甲醇類(lèi)看看。
5.峰形：用時(shí)出現(xiàn)差異。像水楊酸化合物(在鄰位上具有羧基或甲氧基的苯酚化合物)等,用乙腈類(lèi)時(shí)拖尾大,用甲醇類(lèi)可抑制。可是,一般情況下,聚合物類(lèi)反相柱,與硅膠柱相比,更具有峰形寬的傾向,特別是用聚苯乙烯分析柱芳香族化合物等時(shí)常見(jiàn)。這在流動(dòng)相是甲醇時(shí)非常顯著,而用乙腈時(shí)不明顯。為此,用聚合物類(lèi)反相用柱時(shí)建議采用后者(乙腈類(lèi)),這是因?yàn)橐译媸鼓z膨潤(rùn)。
6.流動(dòng)相的脫氣：甲醇與水混合時(shí)發(fā)熱,多余的溶解空氣較易變?yōu)槊摮鰵馀?脫氣容易).而乙腈由于吸熱冷卻,隨著慢慢回到室溫,產(chǎn)生氣泡,所以要考慮脫氣 (加溫?cái)嚢?過(guò)濾膜,He脫氣等)。
結(jié)論：以上反相色譜法流動(dòng)相常用的乙腈和甲醇進(jìn)行了比較。粗略地講是,使用乙腈HPLC級(jí)最好,在選擇性,峰形差時(shí)試用甲醇HPLC,但根據(jù)各種不同性質(zhì)設(shè)計(jì)分析條件也是必要的。