土壤銨態(tài)氮試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法 100T/96S
注 意 ：正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義：
土壤中的銨態(tài)氮可被土壤膠體吸附，呈交換性銨狀態(tài)氮肥，也可溶解在土壤溶液中，能直接被植物吸收利用，屬于速效性氮素。
測(cè)定原理：
土壤中的銨態(tài)氮在強(qiáng)堿性介質(zhì)中與次氯酸鹽和苯酚作用，生成水溶性染料靛酚藍(lán)，在 625nm
處有特征吸收峰，吸光值與銨態(tài)氮含量成正比。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：
天平、常溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、振蕩儀。
試劑組成和配制：
提取液：液體 110mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：粉劑×2 瓶，4℃避光保存。臨用前根據(jù)用量每瓶加 4mL 雙蒸水溶解，現(xiàn)配現(xiàn)用。
試劑二：液體 8mL×1 瓶，4℃避光保存。
試劑三：液體 2mL×1 瓶，4℃保存。
樣本處理：
按照土壤質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱(chēng)取約 0.1g 新鮮土樣，加入
1mL 提取液），振蕩提取 1h，10000g ，25℃離心 10min，取上清液待測(cè)。
測(cè)定操作表：
1、 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 625nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 操作表
空白管 | 測(cè)定管 | |
樣本（μL） | 20 | |
提取液（μL） | 20 | |
試劑一（μL） | 80 | 80 |
試劑二（μL） | 80 | 80 |
充分混勻，25℃靜置 1h | ||
試劑三（μL） | 20 | 20 |
充分混勻，于微量石英比色皿/96 孔板中，蒸餾水調(diào)零，測(cè)定 625nm 處吸光值 A，分別 記為 A 空白管和 A 測(cè)定管，△A=A 測(cè)定管-A 空白管 | ||
計(jì)算公式
a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)：y =0.1522x-0.0009，R2= 0.9993
NH +—N 含量（mg/kg 鮮重）=（△A+0.0009）÷ 0.1522÷W
= 6.57×（△A+0.0009）÷W
W ：樣本質(zhì)量，g
b.用 96 孔板測(cè)定的
計(jì)算公式如下 ：
標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)：y = 0.0761x-0.0009，R2= 0.9993
NH +—N 含量（mg/kg 鮮重）=（△A+0.0009）÷ 0.0761÷W
= 13.14×（△A+0.0009）÷W
W：樣本質(zhì)量，g
注意事項(xiàng) ：
1 .試劑一必須避光低溫保存，配制好的試劑一 4℃保存不能超過(guò) 20 天。
2. 浸提液最好在當(dāng)日完成測(cè)定，如果不能完成，可冷凍保存，但不能超過(guò)兩天。
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