土壤堿性蛋白酶（Solid - Alcalase Protease，S-ALPT）
試劑盒說明書
微量法100管/48樣
注 意 ：正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
土壤蛋白酶參與土壤中存在的氨基酸、蛋白質(zhì)以及其他含蛋白質(zhì)氮的有機化合物的轉(zhuǎn)化，其水解產(chǎn)物是高等植物的氮源之一。S-ALPT在堿性環(huán)境下催化蛋白質(zhì)水解，與土壤有機質(zhì)含量、氮素及其他土壤性質(zhì)有關(guān)。
測定原理：
堿性條件下，S-ALPT可將酪蛋白水解產(chǎn)生酪氨酸；在堿性條件下，酪氨酸還原磷鉬酸化合物生成鎢藍；在680nm有特征吸收峰。
實驗中所需儀器及設(shè)備：
可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、磁力攪拌器、可調(diào)式移液槍、微量石英比色皿/96孔板、雙蒸水
試劑組成和配置：
試劑一：液體20mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前加入6ml蒸餾水充分溶解；用不完的試劑4℃保存；
試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前加入2mL試劑七，沸水浴加熱溶解，然后加入8ml試劑一，充分混勻備用，用不完的試劑4℃保存；
試劑四：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前加入30ml蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑4℃保存；
試劑五：液體8mL×1瓶，4℃保存；
試劑六：液體1.5mL×1支，0.05mg/ml標準酪氨酸溶液，4℃保存；
試劑七：液體5mL×1瓶，4℃保存；
樣品處理：
新鮮土樣自然風干或37度烘箱風干，過30~50目篩。
測定操作：
1、分光光度計或酶標儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至680nm，蒸餾水調(diào)零。
2、試劑二、三和四40℃水浴10min。
3、樣本測定：
試劑名稱 | 測定管 | 對照管 |
風干土樣（g） | 0.02 | 0.02 |
試劑一（μL） | 150 | |
試劑三（μL） | 150 |
混勻后，40℃水浴30min，振蕩5-6次，使土樣與反應(yīng)液充分接觸
試劑二（μL） | 50 | 50 |
混勻，8000g 25℃離心10min，取上清液，在EP管或96孔板中加入下列試劑
測定管 | 對照管 | 標準管 | |
上清液（μL） | 60 | 60 | |
試劑六（μL） | 60 | ||
試劑四（μL） | 280 | 280 | 280 |
試劑五（μL） | 60 | 60 | 60 |
混勻，40℃水浴20min，8000g 25℃離心10min，取上清液200μL，680nm下讀取各管吸光值A
注意：標準管只需測一次。每個測定管設(shè)一個對照管。
S-ALPT活性計算：
單位定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1mg酪氨酸為一個 S-ALPT活力單位。
S-ALPT(mg/d/g土樣)=C標準×(A測定管-A對照管)÷A標準管×V反總÷W÷T=24×(A測定管-A對照管)÷A標準管
C標準管：標準管濃度，0.05mg/mL；V反總：反應(yīng)體系總體積，0.2mL；T：反應(yīng)時間，30min=1/48d； W：樣本質(zhì)量，0.02g。
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