土壤酸性木聚糖酶（Soil Acidic Xylanase，S-ACX）測定試劑盒說明書
微量法100T/48S
注 意 ：正式測定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義：
木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物產(chǎn)生，能催化水解木聚糖，也被稱為戊聚糖酶或半纖維素酶，可分解釀造或飼料工業(yè)中的原料細(xì)胞壁以及β-葡聚糖，降低釀造中物料的粘度，促進(jìn)有效物質(zhì)的釋放，以及降低飼料中的非淀粉多糖，促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用，因而廣泛的應(yīng)用于釀造和飼料工業(yè)中，ACX一般分離自耐酸的真菌，細(xì)菌及部分霉菌。
測定原理：
ACX在酸性環(huán)境下能將木聚糖降解成還原性寡糖和單糖，進(jìn)一步在沸水浴條件下與3,5-二硝基水楊酸發(fā)生顯色反應(yīng)，在540nm處有特征吸收峰，反應(yīng)液顏色的深淺與酶解產(chǎn)生的還原糖量成正比，通過測定反應(yīng)液在540nm吸光值增加速率，可計(jì)算ACX活力。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：
天平、常溫離心機(jī)、震蕩儀、恒溫水浴鍋、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板。
試劑組成和配制：
緩沖液：液體10mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體3mL×1瓶，4℃避光保存。
試劑二：液體10mL×1瓶，4℃避光保存。
樣品處理
新鮮土樣風(fēng)干，過30-50目篩。
測定操作表：
1、 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長至540nm。
2、 操作表
對(duì)照管 | 測定管 | |
土樣（g） | 0.02 | 0.02 |
緩沖液（μL） | 150 | 100 |
試劑一（μL） | 50 | |
混勻，50℃震蕩反應(yīng)30min，立即90℃水浴10min，8000g，25℃離心10min，取上清100μL | ||
試劑二（μL） | 100 | 100 |
混勻，90℃水浴中顯色5min，取180μL于微量石英比色皿/96孔板測定540nm處吸光值A，分別記為A對(duì)照管、A測定管，△A=A測定管-A對(duì)照管。 | ||
S-ACX計(jì)算公式：
a. 用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 2.5554x - 0.002 ，R2 = 0.9983
酶活定義：50℃，pH4.8條件下，每克土壤每天分解木聚糖產(chǎn)生1μmol 還原糖所需的酶量為一個(gè)酶活單位。
S-ACX活力（μmol/d/g土樣）= （△A+0.002）÷ 2.5554 ×V反總×103÷ W÷T÷ 150
=18.78 ×（△A+0.002）÷ W
V反總：反應(yīng)總體積，0.15mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1/48d；1000：1mmol/L =103μmol/L；150：木糖分子量。
b.用96孔板測定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 1.2777x - 0.002 ，R2 = 0.9983
酶活定義：50℃，pH4.8條件下，每克土壤每天分解木聚糖產(chǎn)生1μmol 還原糖所需的酶量為一個(gè)酶活單位。
S-ACX活力（μmol/d/g土樣）=（△A+0.002）÷1.2777×V反總×103÷ W÷T÷ 150
= 37.56 ×（△A+0.002）÷ W
V反總：反應(yīng)總體積，0.15mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1/48d；1000：1mmol/L =103μmol/L；150：木糖分子量。
注意事項(xiàng)：
1. 保證震蕩反應(yīng)30min，使酶與底物充分接觸。
2. 注意90℃水浴防止爆開，以免改變反應(yīng)體系。
提供商 |
優(yōu)利科（上海）生命科學(xué)有限公司 | 下載次數(shù) |
8次 |
資料大小 |
37.5KB | 資料類型 |
WORD 文檔 |
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