土壤脫氫酶（Soil dehydrogenase, sDHA）試劑盒說明書
微量法100T/96S
注 意 ：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義：
土壤脫氫酶(Soil dehydrogenase, sDHA)的活性可以反映土壤體系內活性微生物量以及其對有機物的降解活性，可以作為土壤微生物的降解性能指標。
測定原理：
氫受體2, 3, 5 - 氯化三苯基四氮唑（2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride，TTC）在細胞呼吸過程中接受氫以后，被還原為三苯基甲鐟（Triphenyl Formazone, TF），在波長485nm處有最大吸收峰，采用分光光度法于485nm測定其吸光值，即得土壤脫氫酶活性。
自備實驗儀器及用品：
篩子、天平、恒溫培養(yǎng)箱或水浴鍋、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水、甲醇（不允許快遞，請用戶自備）。
試劑的組成和配制：
試劑一：粉劑×1瓶，使用前加10mL試劑二溶解，4℃避光保存（盡量現(xiàn)配現(xiàn)用）。
試劑二：液體20mL×1瓶，4℃保存。
試劑三：甲醇，自備。
樣品處理：測定步驟和操作表：
新鮮土樣自然風干或37度烘箱風干，過30~50目篩。
空白管 | 測定管 | |
樣品（g） | 0.05 | |
試劑一（μL） | 100 | |
試劑二（μL） | 100 | |
充分混勻，37℃培養(yǎng)24h | ||
試劑三（μL） | 900 | 900 |
振蕩1h，8000g，25℃，離心5min，取200μL上清于微量石英比色皿/96孔板，測定A485，△A=A測定-A空白管?？瞻坠苤灰鲆还?。 | ||
脫氫酶活力計算：
標準曲線：y = 0.0211x - 0.0312；R2 = 0.9988；x為標準品濃度（μg/mL），y為吸光值。
酶活單位定義：在37℃時，每克土壤樣品每天催化產生1μgTF為一個酶活性單位。
sDHA（μg/ d /g 土樣）=（△A+0.0312）÷ 0.0211×V反總÷W÷T= 47.39×（△A+0.0312）÷W
V反總：反應總體積，1mL；T：培養(yǎng)時間，1d；W：樣品質量，g
注意事項：
配制好的試劑一避光保存于4℃，最好在一周內使用，若出現(xiàn)紅色，則不能使用。
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