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液相色譜法測定紫花苜蓿青貯中的有機酸
液相色譜法測定紫花苜蓿青貯中的有機酸
紫花苜蓿是豆科苜蓿屬多年生草本植物，可以加工成苜蓿草粉，作為家畜配合飼料的主要原料使用，起平衡日糧氨基酸、提供豐富的維生素的作用，并提供纖維素。紫花苜蓿莖葉中含有豐富的蛋白質(zhì)、礦物質(zhì)、多種維生素及胡蘿卜素，特別是葉片中含量更高。
苜蓿青貯或半干青貯，養(yǎng)分損失小，包括半干青貯，加甲酸青貯，拉伸膜青貯等三種技術紫花苜蓿（Medicago sativa）青貯之后，原料中的可溶性糖等在植物酶或微生物作用下，部分轉(zhuǎn)化為乳酸、乙酸、丙酸、丁酸等有機酸，青貯飼料的PH下降，抑制有害微生物的繁衍。
乳酸的測定有蒸餾法、液相色譜法、酶法等，乙酸、丙酸、丁酸等揮發(fā)性脂肪酸的測定常用氣相色譜法。本方案采用極性較強的離子交換色譜柱，用液相色譜儀對紫花苜蓿青貯飼料的浸提液進行有機酸測定，探討了用液相色譜儀一次性測定乳酸和揮發(fā)性脂肪酸方法的可行性與準確度。
本方法樣品處理過程簡單，分離效果理想，相對標準差低，回收率好，具有良好的重現(xiàn)性和精密度，同時測定紫花苜蓿青貯浸提液中的乳酸、乙酸、丙酸、丁酸，約20min即可分離*，所以用HPLC測定紫花苜蓿青貯飼料中有機酸更為簡單、方便、快捷。
儀器
LC600B等度液相色譜儀（南京科捷分析儀器有限公司），包括LC600B高壓恒流泵1臺、SPD600B紫外檢測器1臺、SCL600B系統(tǒng)控制器1臺、8725i手動進樣閥1只、反控色譜工作站1 套（內(nèi)置反控主機）、液相色譜柱1根等。
樣品處理
準確稱取20g紫花苜蓿青貯，加入200mL蒸餾水，均質(zhì)1min，4層紗布過濾，濾液用試紙精濾，再用0.45μm濾膜過濾，浸提液待測。
色譜條件
色譜柱：Shodex KC-811色譜柱300mm×8mm
流動相：3mM高氯酸
柱溫：50℃
檢測波長：210nm
流速：1mL/min
進樣量：5μL
色譜圖：
1 乳酸；2 乙酸；3 丙酸；4 丁酸