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HPLC固定相:疏水性相互作用固定相

閱讀:1570        發(fā)布時(shí)間:2016-1-20

  疏水性相互作用色譜(HIC)是為了適應(yīng)活性生物大分子,特別是蛋白質(zhì)的分離而發(fā)展起來的一種液相色譜方法。

  分離機(jī)理與反相色譜的強(qiáng)疏水性作為類型,但是其分離機(jī)制更多地依賴于溶質(zhì)與填料表面之間弱的疏水性相互作用。HIC柱填料的表面具有弱疏水性特征,在高離子強(qiáng)度流動(dòng)相條件下,蛋白質(zhì)分子中的疏水性部分與填料表面產(chǎn)生疏水性相互作用而被吸附,當(dāng)流動(dòng)相的離子強(qiáng)度逐漸降低時(shí),蛋白樣品則按其疏水性特征被依次洗脫,疏水性越強(qiáng),洗脫的時(shí)間越長,進(jìn)而實(shí)現(xiàn)分離。與反相色譜比較,HIC方法避免了流動(dòng)相中使用大量有機(jī)溶劑,能有效的保持被分離物質(zhì)的生物活性,因此在生化樣品的分離純化方面被廣泛采用。

  常見的商品鍵合相HIC填料基質(zhì)材料包括硅膠和高聚物兩種。高聚物基質(zhì)包括多糖型凝膠和合成高聚物微球等。

  為了提高基質(zhì)表面的疏水性,可以采用鍵合羥丙基、甲基、丙基、丁基、苯基、戊基、苯甲基等段煉烷烴的方法,也可以在硅膠上先鍵合上環(huán)氧丙氧基三乙氧基硅烷,再在路易斯酸催化下接上短鏈烷氧基制成醚型鍵合相;將聚乙二醇與環(huán)氧化硅膠反相,則可制備出聚乙二醇型HIC填料。

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