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液相色譜儀色譜柱的再生用溶劑及其順序

閱讀:1349        發(fā)布時(shí)間:2016-3-10

  除非特殊說(shuō)明,在所有情況下,所用溶劑的體積應(yīng)該是色譜柱體積的40~60倍。應(yīng)在清洗過(guò)程開(kāi)始和結(jié)束時(shí)各測(cè)一次柱效和容量因子等色譜參數(shù),比較液相色譜儀色譜柱性能的改善,以確定清洗的效果。確保色譜柱中沒(méi)有樣品盒緩沖溶液,清洗前所用的溶劑應(yīng)與zui初清洗時(shí)所用的溶劑相溶。應(yīng)確保實(shí)驗(yàn)測(cè)試時(shí)所用的流動(dòng)相與色譜柱中zui后的溶劑相溶。

  zui常見(jiàn)色譜柱再生用溶劑及其順序見(jiàn)下表:

 

填料類(lèi)型

                                               再生用溶劑及其順序

正相填料

用四氫呋喃沖洗;用甲醇沖洗;用四氫呋喃沖洗;二氯甲烷沖洗;用無(wú)本正己烷沖洗

反相填料

HPLV級(jí)水沖洗,沖洗時(shí)進(jìn)4等份的200µL二甲亞砜;用甲醇沖洗;用氯仿沖洗;用甲醇沖洗;

陰離子交換填料

HPLC級(jí)水沖洗;用甲醇沖洗;用氯仿沖洗

陽(yáng)離子交換填料

HPLC級(jí)水沖洗;在沖洗的過(guò)程中進(jìn)4等份的200µLDMSO;四氫呋喃清洗

蛋白質(zhì)凝膠過(guò)濾填料

去除蛋白質(zhì)尺寸排阻介質(zhì)中的污染有兩種清洗/再生的方法:1弱保留蛋白質(zhì),用30mol/L pH3.0磷酸鹽緩沖液沖洗;2強(qiáng)保留蛋白質(zhì),用100%的水到100%的乙腈梯度洗脫60min

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