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產(chǎn)品名稱：NEB Q5定點(diǎn)突變?cè)噭┖?不含感受態(tài)細(xì)胞(E0552S)現(xiàn)貨供應(yīng)

產(chǎn)品貨號(hào)：E0552S

產(chǎn)品品牌：NEB

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

Q5定點(diǎn)突變?cè)噭┖校ú缓惺軕B(tài)細(xì)胞）可以在2小時(shí)內(nèi)快速對(duì)雙鏈質(zhì)粒DNA進(jìn)行定點(diǎn)突變。該試劑盒使用穩(wěn)定的Q5熱啟動(dòng)超保真DNA聚合酶，結(jié)合客戶自行設(shè)計(jì)的引物，在各種質(zhì)粒中引入插入、缺失和替換突變。PCR后將擴(kuò)增材料直接添加到du特的激酶-連接酶-DpnI（KLD）酶混合液中，進(jìn)行快速室溫環(huán)化和模板去除（5分鐘）。將質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到高效級(jí)E.coli感受態(tài)細(xì)胞（不隨試劑盒提供），以確保轉(zhuǎn)化長(zhǎng)度至少為20kb的質(zhì)粒能獲得穩(wěn)定的結(jié)果。也提供含感受態(tài)細(xì)胞的試劑盒

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)：

使用預(yù)混液、du特的多酶 KLD 酶混合液和快速聚合酶可確保大多數(shù)質(zhì)粒的突變反應(yīng)在兩小時(shí)內(nèi)完成。

注意事項(xiàng)：

1.如果得到的質(zhì)粒不包含所需的突變（野生型序列），建議在PCR步驟中使用≤10ng的模板。另外，也可將KLD溫育時(shí)間延長(zhǎng)至30-60分鐘來(lái)減少野生型質(zhì)粒的背景。

2.如果沒(méi)有菌落或菌落很少，請(qǐng)確保引物設(shè)計(jì)正確。除引入缺失外，設(shè)計(jì)的兩條引物的5′末端應(yīng)背靠背對(duì)齊，以利于進(jìn)行指數(shù)擴(kuò)增。為得到最佳結(jié)果，推薦使用NEB在線引物設(shè)計(jì)軟件NEBaseChanger™設(shè)計(jì)引物并計(jì)算退火溫度。

3.如果沒(méi)有PCR產(chǎn)物或產(chǎn)物很少，請(qǐng)確保使用了最佳退火溫度（Ta）。高保真聚合酶適合Tm+3退火溫度。使用NEB在線引物設(shè)計(jì)軟件NEBaseChanger™計(jì)算Ta。另外，可以使用梯度PCR和瓊脂糖凝膠分析來(lái)確定最佳退火溫度。

產(chǎn)品選購(gòu)：

天津益元利康生物科技有限公司提供NEB Q5定點(diǎn)突變?cè)噭┖?不含感受態(tài)細(xì)胞(E0552S)現(xiàn)貨供應(yīng)，歡迎選購(gòu)！