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大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞(E.coli DH5α)制備

閱讀:912      發(fā)布時間:2024-9-25
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一、DH5α

DH5α是大腸桿菌(Escherichia coli)的一種感受態(tài)細(xì)胞系,通常被用于分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中。這些細(xì)胞被設(shè)計成對外源DNA接受性較高,因此在分子克隆、DNA轉(zhuǎn)化和質(zhì)粒擴(kuò)增等實(shí)驗(yàn)中被廣泛使用。DH5α感受態(tài)細(xì)胞對于吸收外源DNA特別有效,這使得它們在基因工程和分子生物學(xué)研究中成為常見的實(shí)驗(yàn)室工具。

二、操作步驟

1、前夜接種受體菌(DH5aDH10B),挑取單菌落于LB培養(yǎng)基中37℃搖床培養(yǎng)過夜(約16小時);

2、取1ml過夜培養(yǎng)物轉(zhuǎn)接于100ml LB培養(yǎng)基中,在37℃搖床上劇烈振蕩培養(yǎng)2.5-3小時(250-300rpm);

3、將0.1M CaCl2溶液置于冰上預(yù)冷;以下步驟需在超凈工作臺和冰上操作;

4、吸取1.5ml培養(yǎng)好的菌液至1.5ml離心管中,在冰上冷卻10分鐘;

54℃3000 g冷凍離心5分鐘;

6、棄去上清,加入100微升預(yù)冷0.1M CaCl2溶液,用移液槍輕輕上下吸動打勻,使細(xì)胞重新懸浮,在冰放置20分鐘;

7 、4℃3000 g冷凍離心5分鐘;

8 、棄去上清,加入100微升預(yù)冷0.1M CaCl2溶液,用移液槍輕輕上下吸動打勻,使細(xì)胞重新懸??;

9 、細(xì)胞懸浮液可立即用于轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)或添加冷凍保護(hù)劑(15% - 20%甘油)后超低溫冷凍貯存?zhèn)溆茫ǎ?/span>70℃)。

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