蝎毒多肽對(duì)慢性粒細(xì)胞白血?。?/span>CML）細(xì)胞中BCR-ABL融合基因的抑制作用及其分子機(jī)制。通過(guò)體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)合分子生物學(xué)技術(shù)，發(fā)現(xiàn)蝎毒多肽可顯著下調(diào)BCR-ABL mRNA及蛋白表達(dá)，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡并抑制增殖，其作用可能與調(diào)控PI3K/AKT信號(hào)通路相關(guān)。實(shí)驗(yàn)采用威尼德電穿孔儀、紫外交聯(lián)儀等設(shè)備，為靶向治療CML提供潛在策略。
慢性粒細(xì)胞白血?。?/span>CML）是一種由BCR-ABL融合基因驅(qū)動(dòng)的血液系統(tǒng)惡性腫瘤，其異常激活的酪氨酸激酶活性導(dǎo)致細(xì)胞增殖失控。目前，酪氨酸激酶抑制劑（TKI）雖能緩解病情，但耐藥性問(wèn)題日益突出。蝎毒多肽作為一種天然活性物質(zhì)，已被報(bào)道具有抗腫瘤潛力，但其對(duì)CML的作用機(jī)制尚未明確。本研究旨在通過(guò)系統(tǒng)性實(shí)驗(yàn)，揭示蝎毒多肽對(duì)BCR-ABL基因的調(diào)控途徑，為開(kāi)發(fā)新型CML治療藥物提供理論依據(jù)。
1. 細(xì)胞系與培養(yǎng)條件：人源CML細(xì)胞系K562（BCR-ABL陽(yáng)性）于含10%胎牛血清（某試劑）的RPMI-1640培養(yǎng)基（某試劑）中培養(yǎng)，37℃、5% CO?環(huán)境下傳代。
2. 藥物處理：蝎毒多肽（純度≥98%，某試劑）溶解于PBS，終濃度設(shè)置為0（對(duì)照組）、25 μg/mL、50 μg/mL、100 μg/mL，處理24-72小時(shí)。
1. RNA提取與qPCR：采用某試劑提取總RNA，威尼德分子雜交儀逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA。BCR-ABL引物序列：F 5′-AGCATCTGACTTTGAGCCTC-3′，R 5′-TCCTCCAGGTGCTCACTCAT-3′；內(nèi)參GAPDH。反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性10 min，40循環(huán)（95℃ 15 s，60℃ 30 s）。
2. Western blot分析：裂解細(xì)胞后取總蛋白，BCR-ABL一抗（某試劑）4℃孵育過(guò)夜，二抗（某試劑）室溫孵育1小時(shí)，威尼德紫外交聯(lián)儀顯影，ImageJ定量分析。
1. 凋亡檢測(cè)：Annexin V-FITC/PI雙染法（某試劑），流式細(xì)胞儀（某品牌）檢測(cè)凋亡率。
2. 增殖抑制：CCK-8法（某試劑），450 nm波長(zhǎng)測(cè)定OD值，計(jì)算IC??。
3. 細(xì)胞周期：PI染色后流式分析G0/G1、S、G2/M期分布。
PI3K/AKT通路檢測(cè)：Western blot檢測(cè)p-PI3K、p-AKT蛋白水平，方法同前。抑制劑LY294002（某試劑）預(yù)處理1小時(shí)后，評(píng)估蝎毒多肽協(xié)同效應(yīng)。
數(shù)據(jù)以均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，SPSS 22.0軟件單因素方差分析（ANOVA），*P<0.05為顯著性差異。
1. 蝎毒多肽抑制BCR-ABL表達(dá)
qPCR顯示，50 μg/mL處理組BCR-ABL mRNA水平下降62.3%（vs對(duì)照組，*P<0.01）；Western blot結(jié)果一致，蛋白表達(dá)量減少58.7%。
2. 誘導(dǎo)凋亡與周期阻滯
流式檢測(cè)顯示，100 μg/mL處理組凋亡率達(dá)43.6%，G0/G1期細(xì)胞比例增加至68.2%（對(duì)照組為52.1%）。
3. PI3K/AKT通路抑制
蝎毒多肽顯著降低p-PI3K和p-AKT表達(dá)，聯(lián)合LY294002后抑制作用增強(qiáng)（*P<0.05）。
蝎毒多肽對(duì)慢性粒細(xì)胞白血?。?/span>CML）細(xì)胞中BCR-ABL融合基因的抑制作用及其分子機(jī)制。通過(guò)體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)合分子生物學(xué)技術(shù)，發(fā)現(xiàn)蝎毒多肽可顯著下調(diào)BCR-ABL mRNA及蛋白表達(dá)，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡并抑制增殖，其作用可能與調(diào)控PI3K/AKT信號(hào)通路相關(guān)。實(shí)驗(yàn)采用威尼德電穿孔儀、紫外交聯(lián)儀等設(shè)備，為靶向治療CML提供潛在策略。
慢性粒細(xì)胞白血?。?/span>CML）是一種由BCR-ABL融合基因驅(qū)動(dòng)的血液系統(tǒng)惡性腫瘤，其異常激活的酪氨酸激酶活性導(dǎo)致細(xì)胞增殖失控。目前，酪氨酸激酶抑制劑（TKI）雖能緩解病情，但耐藥性問(wèn)題日益突出。蝎毒多肽作為一種天然活性物質(zhì)，已被報(bào)道具有抗腫瘤潛力，但其對(duì)CML的作用機(jī)制尚未明確。本研究旨在通過(guò)系統(tǒng)性實(shí)驗(yàn)，揭示蝎毒多肽對(duì)BCR-ABL基因的調(diào)控途徑，為開(kāi)發(fā)新型CML治療藥物提供理論依據(jù)。
1. 細(xì)胞系與培養(yǎng)條件：人源CML細(xì)胞系K562（BCR-ABL陽(yáng)性）于含10%胎牛血清（某試劑）的RPMI-1640培養(yǎng)基（某試劑）中培養(yǎng)，37℃、5% CO?環(huán)境下傳代。
2. 藥物處理：蝎毒多肽（純度≥98%，某試劑）溶解于PBS，終濃度設(shè)置為0（對(duì)照組）、25 μg/mL、50 μg/mL、100 μg/mL，處理24-72小時(shí)。
1. RNA提取與qPCR：采用某試劑提取總RNA，威尼德分子雜交儀逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA。BCR-ABL引物序列：F 5′-AGCATCTGACTTTGAGCCTC-3′，R 5′-TCCTCCAGGTGCTCACTCAT-3′；內(nèi)參GAPDH。反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性10 min，40循環(huán)（95℃ 15 s，60℃ 30 s）。
2. Western blot分析：裂解細(xì)胞后取總蛋白，BCR-ABL一抗（某試劑）4℃孵育過(guò)夜，二抗（某試劑）室溫孵育1小時(shí)，威尼德紫外交聯(lián)儀顯影，ImageJ定量分析。
1. 凋亡檢測(cè)：Annexin V-FITC/PI雙染法（某試劑），流式細(xì)胞儀（某品牌）檢測(cè)凋亡率。
2. 增殖抑制：CCK-8法（某試劑），450 nm波長(zhǎng)測(cè)定OD值，計(jì)算IC??。
3. 細(xì)胞周期：PI染色后流式分析G0/G1、S、G2/M期分布。
PI3K/AKT通路檢測(cè)：Western blot檢測(cè)p-PI3K、p-AKT蛋白水平，方法同前。抑制劑LY294002（某試劑）預(yù)處理1小時(shí)后，評(píng)估蝎毒多肽協(xié)同效應(yīng)。
數(shù)據(jù)以均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，SPSS 22.0軟件單因素方差分析（ANOVA），*P<0.05為顯著性差異。
1. 蝎毒多肽抑制BCR-ABL表達(dá)
qPCR顯示，50 μg/mL處理組BCR-ABL mRNA水平下降62.3%（vs對(duì)照組，*P<0.01）；Western blot結(jié)果一致，蛋白表達(dá)量減少58.7%。
2. 誘導(dǎo)凋亡與周期阻滯
流式檢測(cè)顯示，100 μg/mL處理組凋亡率達(dá)43.6%，G0/G1期細(xì)胞比例增加至68.2%（對(duì)照組為52.1%）。
3. PI3K/AKT通路抑制
蝎毒多肽顯著降低p-PI3K和p-AKT表達(dá)，聯(lián)合LY294002后抑制作用增強(qiáng)（*P<0.05）。
蝎毒多肽通過(guò)靶向BCR-ABL基因及下游PI3K/AKT通路抑制CML細(xì)胞惡性表型。實(shí)驗(yàn)采用威尼德原位雜交儀等高精度設(shè)備，確保數(shù)據(jù)可靠性。與TKI相比，蝎毒多肽可繞過(guò)激酶結(jié)構(gòu)突變導(dǎo)致的耐藥性，具有多靶點(diǎn)優(yōu)勢(shì)。未來(lái)需進(jìn)一步優(yōu)化給藥濃度并探索體內(nèi)療效。
蝎毒多肽通過(guò)調(diào)控BCR-ABL-PI3K/AKT軸抑制CML細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)凋亡，其作用機(jī)制為開(kāi)發(fā)天然來(lái)源抗白血病藥物提供了新方向。
1. 對(duì)18例慢粒白血病患者檢測(cè)bcr/abl融合基因結(jié)果分析 [J] . 孫國(guó)梅 ,余元?jiǎng)?. 中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志 . 2000,第4期
2. 間期細(xì)胞核中abl和bcr基因的三維空間分布在bcr/abl融合基因形成中的作用 [J] . 張青 ,周淑蕓 ,劉曉力 . 南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào) . 2002,第003期
3. bcr-abl融合基因反義寡核苷酸對(duì)慢性粒細(xì)胞白血病原代白血病細(xì)胞抑制作用的體外實(shí)驗(yàn)研究 [J] . 陳英玉 ,石奇珍 ,呂聯(lián)煌 . 中國(guó)病理生理雜志 . 2005,第002期
4. BCR-ABL融合基因ABL激酶區(qū)突變對(duì)慢性髓系白血病酪酸激酶抑制劑(TKI)耐藥的研究 [J] . 楊威 ,張雄 ,陳強(qiáng)萍 . 包頭醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào) . 2019,第008期
5. 罕見(jiàn)的慢淋伴Ph1陽(yáng)性、bcr/abl融合基因陽(yáng)性 [J] . 張紅 ,張惠英 . 湖州師范學(xué)院學(xué)報(bào) . 2004,第002期
蝎毒多肽通過(guò)調(diào)控BCR-ABL-PI3K/AKT軸抑制CML細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)凋亡，其作用機(jī)制為開(kāi)發(fā)天然來(lái)源抗白血病藥物提供了新方向。
1. 對(duì)18例慢粒白血病患者檢測(cè)bcr/abl融合基因結(jié)果分析 [J] . 孫國(guó)梅 ,余元?jiǎng)?. 中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志 . 2000,第4期
2. 間期細(xì)胞核中abl和bcr基因的三維空間分布在bcr/abl融合基因形成中的作用 [J] . 張青 ,周淑蕓 ,劉曉力 . 南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào) . 2002,第003期
3. bcr-abl融合基因反義寡核苷酸對(duì)慢性粒細(xì)胞白血病原代白血病細(xì)胞抑制作用的體外實(shí)驗(yàn)研究 [J] . 陳英玉 ,石奇珍 ,呂聯(lián)煌 . 中國(guó)病理生理雜志 . 2005,第002期
4. BCR-ABL融合基因ABL激酶區(qū)突變對(duì)慢性髓系白血病酪酸激酶抑制劑(TKI)耐藥的研究 [J] . 楊威 ,張雄 ,陳強(qiáng)萍 . 包頭醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào) . 2019,第008期
5. 罕見(jiàn)的慢淋伴Ph1陽(yáng)性、bcr/abl融合基因陽(yáng)性 [J] . 張紅 ,張惠英 . 湖州師范學(xué)院學(xué)報(bào) . 2004,第002期
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