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技術(shù)文章

生物分子類(lèi)實(shí)驗(yàn)室常用實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理匯總-3

閱讀:621          發(fā)布時(shí)間:2014-12-8

七、噬菌體展示技術(shù)

噬菌體展示技術(shù)是將外源蛋白或多肽的DNA序列插入到噬菌體外殼蛋白結(jié)構(gòu)基因的適當(dāng)位置,使外源基因隨外殼蛋白的表達(dá)而表達(dá),同時(shí),外源蛋白隨噬菌體的重新組裝而展示到噬菌體表面的生物技術(shù)。

噬菌體展示技術(shù)是將多肽或蛋白質(zhì)的編碼基因或目的基因片段克隆入噬菌體外殼蛋白結(jié)構(gòu)基因的適當(dāng)位置,在閱讀框正確且不影響其他外殼蛋白正常功能的情況下,使外源多肽或蛋白與外殼蛋白融合表達(dá),融合蛋白隨子代噬菌體的重新組裝而展示在噬菌體表面。被展示的多肽或蛋白可以保持相對(duì)獨(dú)立的空間結(jié)構(gòu)和生物活性,以利于靶分子的識(shí)別和結(jié)合。肽庫(kù)與固相上的靶蛋白分子經(jīng)過(guò)一定時(shí)間孵育后,洗去未結(jié)合的游離噬菌體,然后以競(jìng)爭(zhēng)受體或酸洗脫下與靶分子結(jié)合吸附的噬菌體,洗脫的噬菌體感染宿主細(xì)胞后經(jīng)繁殖擴(kuò)增,進(jìn)行下一輪洗脫,經(jīng)過(guò)3輪~5輪的“吸附-洗脫-擴(kuò)增”后,與靶分子特異結(jié)合的噬菌體得到高度富集。所得的噬菌體制劑可用來(lái)做進(jìn)一步富集有期望結(jié)合特性的目標(biāo)噬菌體。

八、RNA提取(Trizol法)

Trizol試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚,其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞,促使核蛋白體的解離,使RNA與蛋白質(zhì)分離,并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯仿時(shí),它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相,離心后可形成水相層和有機(jī)層,這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開(kāi)。水相層(無(wú)色)主要為RNA,有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。

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