ELISA試劑盒的血清標本收集及檢測樣品的處理方法

一、血清標本收集：

1. 因此在ELISA試劑盒測定中試劑的預備最為樞紐的是，在實驗開始前，將試劑盒先從冰箱中拿出來，在室溫下放置20分鐘以上后，再進行測定，以使試劑盒在使用前與室溫平衡。

2. 加血清樣本及反應試劑在現(xiàn)在的ELISA試劑盒中，血清樣本加入要使用微量加樣器加入樣本的步驟。

3. 溫育是ELISA測定中影響測定成敗最為樞紐的一個因素。目前臨床上使用血清標本測定的標志物一般有傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標志物、激素、特種蛋白、細胞因子和治療藥物等。試劑的加入在國產(chǎn)試劑盒中基本上均是從滴瓶中滴加，除了要留意滴加的角度外，滴加的速度也很重要，滴加太快，很輕易泛起重復滴加或加在兩孔之間的現(xiàn)象，這樣就會在孔內(nèi)的非包被區(qū)泛起非特異吸附，從而引起非特異顯色。

4. 如可的松在早晨4～6點之間，會有一峰值泛起：生長激素、促黃體激素（LH）和促卵泡激素（FSH）均以陣發(fā)性方式開釋。

5. 因此，在測定此類激素時，ELISA試劑盒要是為了在后面的溫育反應步驟中，能使反應微孔內(nèi)的溫度能較快地達到所要求的高度，以知足測定要求。再如治療藥物的檢測，應根據(jù)藥代動力學選擇服藥后的最適時間抽血檢測。

6. 溫育所需時間與溫度成反比，即溫度越高，則所需時間相對較短。使用微量加樣器加樣必需留意的樞紐點是：加樣不可太快，要避免加在孔壁上部，ELISA試劑盒不可濺出和產(chǎn)氣憤泡。對用于激素和治療藥物測定，要留意收集時間甚或體位有可能會對測定結果產(chǎn)生影響。

二、檢測樣品的處理方法：

1.通常我們可用于ELISA檢測的樣本是有多種類型的，如血清、血漿、尿液、細胞培養(yǎng)上清或組織勻漿液等，不同類型的檢測樣本前期的處理方法是不一樣的。正確的處理樣本是保證ELISA檢測的正確性和準確性的第一步，下面簡單介紹一下不同類型的樣本的處理方法。

2.總的來說，因為ELISA只能檢測可溶性蛋白的含量，所以應保證所有樣本均為澄清的液體，沉淀或懸浮物都應離心去除。

3.為了保證檢測的準確性，保存于-20℃或-80℃的樣本最好在1~6個月內(nèi)檢測；4℃保存的樣本應在1周內(nèi)進行檢測。

4.另外，還應保證樣本不含NaN3，因為NaN3會抑制HRP的活性，從而導致假陰性的結果。