ELISA試劑盒的血清標(biāo)本收集及檢測(cè)樣品的處理方法

一、血清標(biāo)本收集：

1. 因此在ELISA試劑盒測(cè)定中試劑的預(yù)備最為樞紐的是，在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，將試劑盒先從冰箱中拿出來(lái)，在室溫下放置20分鐘以上后，再進(jìn)行測(cè)定，以使試劑盒在使用前與室溫平衡。

2. 加血清樣本及反應(yīng)試劑在現(xiàn)在的ELISA試劑盒中，血清樣本加入要使用微量加樣器加入樣本的步驟。

3. 溫育是ELISA測(cè)定中影響測(cè)定成敗最為樞紐的一個(gè)因素。目前臨床上使用血清標(biāo)本測(cè)定的標(biāo)志物一般有傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標(biāo)志物、激素、特種蛋白、細(xì)胞因子和治療藥物等。試劑的加入在國(guó)產(chǎn)試劑盒中基本上均是從滴瓶中滴加，除了要留意滴加的角度外，滴加的速度也很重要，滴加太快，很輕易泛起重復(fù)滴加或加在兩孔之間的現(xiàn)象，這樣就會(huì)在孔內(nèi)的非包被區(qū)泛起非特異吸附，從而引起非特異顯色。

4. 如可的松在早晨4～6點(diǎn)之間，會(huì)有一峰值泛起：生長(zhǎng)激素、促黃體激素（LH）和促卵泡激素（FSH）均以陣發(fā)性方式開(kāi)釋。

5. 因此，在測(cè)定此類激素時(shí)，ELISA試劑盒要是為了在后面的溫育反應(yīng)步驟中，能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度能較快地達(dá)到所要求的高度，以知足測(cè)定要求。再如治療藥物的檢測(cè)，應(yīng)根據(jù)藥代動(dòng)力學(xué)選擇服藥后的最適時(shí)間抽血檢測(cè)。

6. 溫育所需時(shí)間與溫度成反比，即溫度越高，則所需時(shí)間相對(duì)較短。使用微量加樣器加樣必需留意的樞紐點(diǎn)是：加樣不可太快，要避免加在孔壁上部，ELISA試劑盒不可濺出和產(chǎn)氣憤泡。對(duì)用于激素和治療藥物測(cè)定，要留意收集時(shí)間甚或體位有可能會(huì)對(duì)測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生影響。

二、檢測(cè)樣品的處理方法：

1.通常我們可用于ELISA檢測(cè)的樣本是有多種類型的，如血清、血漿、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清或組織勻漿液等，不同類型的檢測(cè)樣本前期的處理方法是不一樣的。正確的處理樣本是保證ELISA檢測(cè)的正確性和準(zhǔn)確性的第一步，下面簡(jiǎn)單介紹一下不同類型的樣本的處理方法。

2.總的來(lái)說(shuō)，因?yàn)镋LISA只能檢測(cè)可溶性蛋白的含量，所以應(yīng)保證所有樣本均為澄清的液體，沉淀或懸浮物都應(yīng)離心去除。

3.為了保證檢測(cè)的準(zhǔn)確性，保存于-20℃或-80℃的樣本最好在1~6個(gè)月內(nèi)檢測(cè)；4℃保存的樣本應(yīng)在1周內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。

4.另外，還應(yīng)保證樣本不含NaN3，因?yàn)镹aN3會(huì)抑制HRP的活性，從而導(dǎo)致假陰性的結(jié)果。