一、操作準備

1、設備應置于環(huán)境溫度低于（設定溫度-5℃）的區(qū)域，推薦室溫25℃。

2、連接電源、氣源并啟動控溫儀，設定溫度（如37±1℃）及濕度（45%-60%）。

3、檢查箱體密封性、氣體管道通暢性及壓力表狀態(tài)。

4、內(nèi)腔紫外線滅菌30分鐘，放置鈀粒（1000g）、干燥劑（500g）及美蘭指示劑。

5、準備無菌手套、培養(yǎng)基及混合氣體（N?:H?:CO?=85%:10%:5%）。

二、厭氧環(huán)境形成流程

1、通過氮氣三次置換操作室內(nèi)空氣：充氮→抽真空→重復至氧含量極低。

2混合氣體置換：以10ml/min流量輸入混合氣，重復2-3次，配合鈀粒催化除氧。

3、通過美蘭指示劑變白確認厭氧狀態(tài)達標。

4、通過傳輸艙或取樣室放入樣本：

(1) 關(guān)閉內(nèi)外門，抽真空至66kPa后注入氮氣至常壓，重復三次；

(2) 最后一次置換使用混合氣體，確保取樣室無氧殘留。

5、操作室手套口直插取放培養(yǎng)皿，避免長時間敞開破壞厭氧環(huán)境。

三、運行與終止

1、每日檢查美蘭指示劑顏色，異常時需重新置換氣體。

2、維持混合氣補入（10ml/min）以抵消微量氧滲透。

3、關(guān)閉電源、氣閥，排空殘留氣體后清潔內(nèi)腔。

4、取出廢料并消毒，定期更換鈀粒與干燥劑（建議每周一次）。

四、注意事項

1、安全規(guī)范?：禁止明火，定期檢測氣體濃度防泄漏，操作全程佩戴手套。

2、設備維護?：每月清潔箱體表面，檢查密封圈老化情況，校準溫控系統(tǒng)。

3、應急處理?：遇斷電需立即關(guān)閉氣閥，重啟后重新置換氣體環(huán)境。