国产精品视频一区二区三区四,亚洲av美洲av综合av,99国内精品久久久久久久,欧美电影一区二区三区电影

聚合酶鏈反應（Polymerase Chain Reaction)簡稱PCR，是一種體外高效擴增特定DNA片段的分子生物學技術。該技術的發(fā)明人是Kary Mullis，他從1983年開始研究PCR技術，1985年開始被逐漸采用，成為分子生物學的一項常規(guī)手段，并得到了廣泛的應用，在臨床診斷、生物醫(yī)學研究和法醫(yī)學領域都具有重要意義。PCR是在體外模擬體內DNA復制的過程，它用加熱的辦法讓需要擴增的DNA片段變性解鏈成兩條單鏈，人工合成的一對引物讓它們結合到DNA模板（分別結合到兩條鏈上）的兩端，DNA聚合酶即可以大量復制該模板。了解了PCR的基本過程，再一起來學習一下PCR體系及各類常見PCR辨析吧！

PCR體系

1. 模板

需要研究或擴增的目的核酸分子，DNA可以直接擴增，RNA需要增加一步逆轉錄，或者在體系中加逆轉錄酶一步法進行RT-PCR擴增；

2. 引物

良好設計的引物，是擴增特異性及擴增效率的關鍵因素之一；

3. Taqase

PCR體系的核心組分，Taqase的性能，直接決定了擴增體系能否達到實驗要求；

針對不同類型的模板、特異性的要求、產物保真度的要求、擴增產物的長度，需要選用能滿足對應要求的Taqase；所選用的酶如果不匹配，實驗是無法成功的；

對一株Taqase的性能評價，主要是如下幾個方面：擴增效率，擴增速度，保真度，除了催化鏈延伸之外的其它活性，抗逆性等；

4. dNTP

dNTP的濃度和質量，也是影響擴增產率的一個重要因素；dNTP分子中，含有一個高能磷酸鍵，是影響dNTP穩(wěn)定性的關鍵因素，高能磷酸鍵的斷裂也是造成dNTP質量不合格的分子層面的原因；

5. Buffer

為PCR反應體系提供穩(wěn)定的工作環(huán)境，主要環(huán)境因素為pH值，離子強度等；

6. Mg++

因為鎂離子對Taqase活性影響大，所以一般buffer之外，還單獨帶一管Mg++，方便用戶靈活調節(jié)體系里面Mg++濃度；

除了上述六種必要的組分之外，還有較多的工具蛋白或者小分子化合物，能對PCR體系起到相應的作用，這方面累積的研究成果也比較多。

各類常見PCR辨析

1. PCR，通常指的是普通PCR，以雙鏈DNA為模板，以dNTP為底物，大量（30個循環(huán)理論上可以使產物增加到模板初始摩爾數的10的9次方倍）擴增雙鏈DNA。產物通常以電泳及凝膠成像方式來分析。

2. qPCR和Real-time PCR，指的是實時熒光定量PCR，以DNA或cDNA為模板，以dNTP為底物，以熒光基團為報告分子，收集熒光信號從而對擴增出的DNA進行定量分析。為避免和RT-PCR（逆轉錄PCR）混淆，現(xiàn)在一般不太常用real-time PCR，通常交流，用qPCR指代更明確。

3. RT-PCR，指的是逆轉錄PCR，以由mRNA逆轉錄成的cDNA為模板，以dNTP為底物，進行DNA的擴增及檢測。

4. RT-qPCR，指的是實時熒光定量逆轉錄PCR，是qPCR+RT-PCR的組合，將總RNA或mRNA逆轉錄成cDNA后再作為模板，以dNTP為底物，進行產物的定量分析。