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干細胞如何傳代

閱讀:649      發(fā)布時間:2024-11-8
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傳 代

1一般在復蘇后第7~10天傳代,之后常規(guī)傳代為6-7天一次。


2吸除廢液。用DPBS(不含鈣鎂離子)輕輕沖洗一遍。


3加入2~3ml的1mg/ml的干細胞專用消化液至培養(yǎng)瓶,輕輕晃動,使之覆蓋底面,置于37℃培養(yǎng)箱內(nèi)消化細胞。

 

4在顯微鏡下觀察,直至克隆脫落(一般需要3~6min)。


 5將帶有脫落克隆的消化液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,放置一會,待克隆自然沉降后將上層吸除,加入H9培養(yǎng)液3ml輕輕混勻,

放置一會,待克隆自然沉降后將上層培養(yǎng)液吸除,重復一次(即H9培養(yǎng)液漂洗2遍,沉降后吸掉上清)。


6加入H9培養(yǎng)液3ml,用1ml移液器吹打2-3次,將克隆塊吹散成大小為原來的約1/10(若想得到大小較均一的克隆塊,

此時可將細胞靜置片刻,待細胞自然沉降后取懸浮于液體中間層的克隆塊傳代),傳代比例根據(jù)母瓶克隆密度和大小而定,一般1:3~1:5傳代。


7放入37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。


8第二天不換液,第三天起每天換液,換液前顯微鏡下將分化的克隆挑除。


 注意:傳代時不能吹打過度,不能吹打成單細胞,保持細胞克隆塊狀,傳代后48小時換液,期間最好不要挪動細胞。每6~7天傳代一次。


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