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生化試劑
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BCA 法蛋白含量測定試劑盒

時間:2025-1-13閱讀:143
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BCA 法蛋白含量測定試劑盒說明書

微量法 100T/96S

 

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義:

樣品可溶性蛋白質(zhì)含量常常用于酶活性計算。此外,可溶性蛋白質(zhì)含量也用于食品等質(zhì)量分析。

測定原理:

堿性條件下,蛋白質(zhì)中半胱氨酸、胱氨酸、色氨酸、酪氨酸以及肽鍵,能將 Cu2+還原成Cu+;2 分子BCA Cu+結(jié)合,生成紫色絡(luò)合物,在 540-595nm 有吸收峰,562nm 處吸收峰zui強。

組成:

產(chǎn)品名稱

DE6004-100T/96S

Storage

試劑A: 液體

25ml

4

試劑B:液體

0.5ml

4

標準品:液體

2ml

4

 

工作液配制:臨用前請根據(jù)擬用工作液體積(樣本數(shù)×0.2ml),將試劑A B 按照 501 的比例混合,蓋緊后充分混勻。

自備儀器和用品:

臺式離心機、恒溫水浴鍋、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板、移液器和蒸餾水。

樣品中可溶性蛋白質(zhì)提?。?/span>

1、液體樣品:澄清液體樣品可以直接測定。

2、組織樣品:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(ml)15~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1ml提取液(自備,根據(jù)需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水)冰浴勻漿,10000rpm,4℃離心 10min,取上清,即待測液。

3 、細菌、細胞:按照細胞數(shù)量(104 個):提取液體積(ml500~10001 的比例(建議 500 萬細胞加入 1ml 提取液,冰浴超聲波破碎細胞功率 300w,超聲 3 秒,間隔 7 秒,總時間 3min;然后 10000rpm, 4℃,離心 10min,取上清置于冰上待測。

測定操作:

1.   可見分光光度計/酶標儀預(yù)熱 30min,調(diào)節(jié)波長到 562 nm,蒸餾水調(diào)零。

2.   工作液置于 60℃水浴預(yù)熱 30 min。



空白管

標準管

測定管


蒸餾水(μl

4



標準品(μl


4


待測液(μl



4

工作液(μl

200

200

200

混勻后置于 60℃保溫 30min,于微量玻璃比色皿/96 孔板,于 562nm 處測定吸光值A,分

別記為A 空白管、A 標準管、A 測定管。

 

注意事項:空白管和標準管只需要做一次。

計算公式:

Cpr (mg/ml)= C 標準品×A 測定管-A 空白管)÷A 標準管-A 空白管

=0.5×A 測定管-A 空白管)÷A 標準管-A 空白管

Cpr (mg/g 鮮重)= C 標準品×A 測定管-A 空白管)÷A 標準管-A 空白管)÷ W

=0.5×A 測定管-A 空白管)÷A 標準管-A 空白管)÷ W W: 樣本質(zhì)量,g

注意事項:

BCA 法蛋白含量測定試劑盒,適用于測定蛋白濃度在 20-5000μg/ml 樣品。測定前取 1-2 個樣做預(yù)實驗,若A 測定管-A 空白管﹥1.5,需將樣本用提取液稀釋后再測定,以確保測定的準確性。

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