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食品中11種合成著色劑的測(cè)定 參考GB 5009.35-2023
合成著色劑是指人工化學(xué)合成方法所制成的有機(jī)色素，因其色彩鮮艷、著色力強(qiáng)、穩(wěn)定性好、生產(chǎn)成本低等特點(diǎn)廣泛應(yīng)用于食品工業(yè)。我國(guó)對(duì)食品中添加合成著色劑有著嚴(yán)格的限制，《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》（GB 2760—2024）中允許使用的合成著色劑有11種，分別為檸檬黃、日落黃、喹啉黃、新紅、莧菜紅、胭脂紅、you惑紅、赤蘚紅、酸性紅、亮藍(lán)和靛藍(lán)，并對(duì)其允許使用的食品類別和最大使用量做了明確規(guī)定。
一、色譜柱篩選
按照食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《食品中合成著色劑的測(cè)定 GB 5009.35-2023》項(xiàng)下分析方法，分別使用4支不同極性C18色譜柱，包括中等級(jí)性CAPCELL PAK C18 MGII、中等級(jí)性CAPCELL PAK C18 KG、高極性CAPCELL PAK C18 AQ、高疏水性SUPERIOREX II ODS色譜柱，以及鍵合金剛烷基團(tuán)的CAPCELL PAK ADME-HR色譜柱，分別對(duì)用戶提供的11種合成著色劑混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)行分析。
如圖1所示，在415nm檢測(cè)波長(zhǎng)下，5支色譜柱分析結(jié)果中只有ADME-HR色譜柱可得到混合標(biāo)準(zhǔn)品中峰1、峰2的良好分析結(jié)果，但在610 nm波長(zhǎng)下，峰11、峰12未得到基線分離；
從C18 MGII、ODS II和C18 KG色譜柱的分析結(jié)果中，可以看到混合標(biāo)準(zhǔn)品中峰1和峰2有分離趨勢(shì)，但未達(dá)到基線分離，同時(shí)在520 nm、610 nm波長(zhǎng)下各峰間均可達(dá)到基線分離。
圖1 色譜柱篩選-GB原方法
【色譜條件】
色譜柱：CP C18 MGII S5; 4.6×250
CP C18 AQ S5; 4.6×250
CP C18 KG S5; 4.6×250
CP ADME HR S5; 4.6×250
SUPERIOREXII ODS S5; 4.6×250
流動(dòng)相：A，0.02 mol/L 乙酸銨 B，甲醇
B(%) 10%(0 min) - 40%(12 min) - 50%(19 min) - 55%(22.5 min) - 95%(24 min) - 95%(33 min) - 10%(34 min) - 10%(42 min)
流動(dòng)速：1.0 mL/min
柱動(dòng)溫：30 ℃
檢動(dòng)測(cè)：PDA 415 nm；520 nm；610 nm
樣動(dòng)品：用戶提供
進(jìn)樣量：10 μL
二、梯度微調(diào)
為改善混合標(biāo)準(zhǔn)品中峰1、峰2以及峰11、峰12的分離，嘗試對(duì)流動(dòng)相梯度進(jìn)行微調(diào)，分別降低0-12 min、22.5-24 min梯度斜率，使用CAPCELL PAK C18 MGII、SUPERIOREX II ODS、CAPCELL PAK C18 KG、CAPCELL PAK ADME-HR色譜柱，分別對(duì)客戶提供11種合成著色劑標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行分析。
其中C18 MGII、ODS II色譜柱可得到混合標(biāo)準(zhǔn)品的良好分析結(jié)果，結(jié)果如圖2、3、表1、2（415 nm分離度）所示，各雜質(zhì)間分離度均大于1.5，滿足基線分離，但兩支色譜柱分析結(jié)果中峰10、11、12出峰位置與參考圖譜中位置反轉(zhuǎn)。
圖2 C18 MGII色譜柱分析圖-梯度微調(diào)
表1 積分表 C18 MGII 梯度微調(diào)
圖3 ODSII色譜柱分析圖-梯度微調(diào)
表2 積分表 ODS II 梯度微調(diào)
【色譜條件】
色譜柱：CP C18 MGII S5; 4.6×250
SUPERIOREXII ODS S5; 4.6×250
流動(dòng)相：A，0.02 mol/L 乙酸銨 B，甲醇
B(%) 5%(0 min) - 25%(12 min) - 50%(19 min) - 55%(22.5 min) - 80%(24 min) - 95%(33 min) - 10%(34 min) - 10%(42 min)
流動(dòng)速：1.0 mL/min
柱動(dòng)溫：30 ℃
檢動(dòng)測(cè)：PDA 415 nm；520 nm；610 nm
樣動(dòng)品：用戶提供
進(jìn)樣量：10 μL
結(jié) 論
綜上所述，按照食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《食品中合成著色劑的測(cè)定 GB 5009.35-2023》項(xiàng)下分析方法，原方法下未能得到所有峰的分離，嘗試對(duì)流動(dòng)相梯度進(jìn)行微調(diào)，使用CAPCELL PAK C18 MGII、SUPERIOREXII ODS色譜柱，均可得到混合標(biāo)準(zhǔn)品的良好分析結(jié)果，各雜質(zhì)間分離度均大于1.5，滿足基線分離。但兩支色譜柱分析結(jié)果中峰10、11、12出峰位置與參考圖譜中位置反轉(zhuǎn)（用戶未提供對(duì)照品單標(biāo)，峰指認(rèn)通過(guò)與標(biāo)準(zhǔn)譜圖對(duì)照獲得）。
《食品中合成著色劑的測(cè)定 GB 5009.35-2023》分析方法推薦用柱
F92533
CP C18 MGII S5; 4.6×250
F41504
SUPERIOREXII ODS S5; 4.6×250