制作凝膠是核酸電泳實(shí)驗(yàn)中的關(guān)鍵步驟，以下是制作凝膠時(shí)需要注意的一些細(xì)節(jié)：
試劑準(zhǔn)備
凝膠配制
充分溶解：將瓊脂糖或聚丙烯酰胺加入到適量的緩沖液中，加熱攪拌使其充分溶解。加熱過程中要不斷攪拌，防止局部過熱導(dǎo)致試劑燒焦或溶液暴沸，確保凝膠溶液均勻一致。
避免過度加熱：溶解瓊脂糖時(shí)，加熱至溶液澄清透明即可，過度加熱可能會(huì)破壞瓊脂糖的結(jié)構(gòu)，影響凝膠的凝固性能和分辨率。
添加添加劑：如需添加溴化乙錠（EB）等染色劑或其他添加劑，應(yīng)在凝膠溶液冷卻至適當(dāng)溫度后再加入，并充分混勻，避免因加入過早導(dǎo)致染色劑失效或因攪拌不勻造成染色不均。
模具準(zhǔn)備
清潔干燥：使用前將電泳槽和梳子等模具洗凈并擦干，避免殘留的雜質(zhì)或水分影響凝膠的凝固和與模具的貼合度。
正確安裝：將模具組裝好，確保密封良好，防止凝膠溶液泄漏。對(duì)于一些可拆卸的模具，要注意各部件的安裝順序和緊密程度。
放置梳子：將梳子垂直插入模具的相應(yīng)位置，確保梳子的齒與模具底部保持適當(dāng)?shù)木嚯x，一般為 1 - 2 mm，以形成合適深度的加樣孔。同時(shí)，要保證梳子放置水平，避免加樣孔出現(xiàn)傾斜或大小不一的情況。
凝膠灌注
控制溫度：將冷卻至約 50 - 60℃的凝膠溶液緩慢倒入模具中。溫度過高可能會(huì)燙傷手指，且會(huì)使模具變形；溫度過低則凝膠可能在倒出前就開始凝固，導(dǎo)致灌注不均勻。
避免氣泡：傾倒凝膠溶液時(shí)，應(yīng)沿著模具的一側(cè)緩慢倒入，盡量避免產(chǎn)生氣泡。如果有氣泡產(chǎn)生，可以用玻璃棒或移液器輕輕將其趕出，以免影響凝膠的質(zhì)量和電泳結(jié)果。
一次灌注完成：盡量一次性將凝膠溶液灌注到模具中，避免多次添加導(dǎo)致凝膠分層或不均勻。如果需要制作較厚的凝膠，可以分多次灌注，但每次灌注的時(shí)間間隔不宜過長，以免先灌注的部分凝固。
凝膠凝固
自然冷卻：讓凝膠在室溫下自然冷卻凝固，不要人為加速冷卻過程，如放入冰箱或用風(fēng)扇吹，否則可能導(dǎo)致凝膠收縮不均勻，產(chǎn)生應(yīng)力，影響電泳時(shí)的分離效果。
避免震動(dòng)：在凝膠凝固過程中，要保持模具靜止，避免震動(dòng)或移動(dòng)，以免破壞凝膠的結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致加樣孔變形或凝膠出現(xiàn)裂縫。
檢查凝固情況：一般凝膠在室溫下放置 30 - 60 分鐘即可凝固?？梢酝ㄟ^觀察凝膠表面是否平整、透明，以及用手指輕輕觸摸凝膠邊緣是否有粘性來判斷凝膠是否凝固。
制作凝膠時(shí)，需要在各個(gè)環(huán)節(jié)嚴(yán)格控制細(xì)節(jié)，以獲得高質(zhì)量的凝膠，為后續(xù)的核酸電泳實(shí)驗(yàn)提供良好的基礎(chǔ)
中級(jí)會(huì)員·2年
