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供貨周期	現(xiàn)貨	規(guī)格	5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
貨號(hào)	BH3557	應(yīng)用領(lǐng)域	醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥

人主動(dòng)脈瓣膜間質(zhì)細(xì)胞永生化（免疫熒光鑒定)

背景描述主動(dòng)脈瓣施半月瓣，位于左心室和主動(dòng)脈之間，抑制射入主動(dòng)脈的血液回流入左心室，主動(dòng)脈瓣鈣化可引起主動(dòng)脈瓣狹窄關(guān)閉不全等，施導(dǎo)致老年退行性心瓣膜病的重要病理改變，其發(fā)病率隨著年齡的增加而升高。有研究表明，瓣膜間質(zhì)細(xì)胞向城固細(xì)胞樣細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化有可能是主動(dòng)脈瓣膜鈣化的病理改變基礎(chǔ)之一。

培養(yǎng)條件準(zhǔn)備基礎(chǔ)培養(yǎng)基+10%FBS+細(xì)胞因子+1%P/S

氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%

細(xì)胞特征1）組織來(lái)源：正常主動(dòng)脈組織

2）形態(tài)：生長(zhǎng)特征貼壁生長(zhǎng)

凍存條件無(wú)血清凍存液。

細(xì)胞檢測(cè)不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

供應(yīng)限制僅供科研使用

運(yùn)輸方式常溫或凍存（T25瓶或者1mL凍存管包裝）

注意事項(xiàng)細(xì)胞接收后的處理：

1）收到細(xì)胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

2）請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過(guò)程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的專用培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。

1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL專用培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，專用培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml專用培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過(guò)夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：

1.吸去培養(yǎng)液，加PBS清洗1-2遍，去PBS。加入0.25%胰酶2ml消化15秒，去胰酶。將培養(yǎng)瓶放37度培養(yǎng)箱，靠殘余胰酶繼續(xù)消化細(xì)胞3-10分鐘直至細(xì)胞變圓（每3分鐘觀察一次。）

2.加12ml專用培養(yǎng)基，吹打均勻，即可分到2個(gè)T25培養(yǎng)瓶里。（細(xì)胞1傳2，若顧客使用培養(yǎng)皿或培養(yǎng)孔板，建議先包被）

3）細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例；

1.細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過(guò)程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來(lái)決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml.

2.1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞，按每1ml凍存液含1×106~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3.將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過(guò)夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的專用培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。

上海語(yǔ)純生物科技有限公司，是由具有*生命科學(xué)、生物技術(shù)背景人員共同創(chuàng)辦的技術(shù)企業(yè)。公司專注于原代細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)試劑產(chǎn)品，為高校、食品、醫(yī)藥、生物研究等領(lǐng)域提供相關(guān)技術(shù)支持和服務(wù)。

公司自成立以來(lái)通過(guò)不斷地科技創(chuàng)新，產(chǎn)品研發(fā)，已為客戶提供定制化細(xì)胞產(chǎn)品以及完整的細(xì)胞培養(yǎng)解決方案，通過(guò)積極地探索、研發(fā)、深化和豐富產(chǎn)品，目前基礎(chǔ)培養(yǎng)基產(chǎn)品種類多達(dá)200多種，細(xì)胞系300多種，原代細(xì)胞接近600種。我們始終以“發(fā)展科學(xué)技術(shù)，關(guān)愛公眾生命健康"為動(dòng)力，通過(guò)技術(shù)創(chuàng)新，廣泛吸納高科技人才，不斷完善產(chǎn)品體系、豐富產(chǎn)品鏈，積極拓展市場(chǎng)，擴(kuò)充應(yīng)用領(lǐng)域，，建立了具有市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力的“語(yǔ)純"品牌。

注意事項(xiàng)

1、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套及口罩操作；

2、為保持本產(chǎn)品的優(yōu)良使用效果，請(qǐng)務(wù)必按照建議的儲(chǔ)存條件進(jìn)行保存；

3、本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或進(jìn)一步生產(chǎn)使用，不可用于臨床診斷或治療。

人主動(dòng)脈瓣膜間質(zhì)細(xì)胞永生化（免疫熒光鑒定)