諾博萊德 線粒體核糖體提取試劑盒 蛋白提取

   NobleRyder P5113 線粒體核糖體提取試劑盒

產(chǎn)品貨號(hào)：P5113

產(chǎn)品名稱：線粒體核糖體提取試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

中文名稱：線粒體核糖體提取試劑盒

規(guī)格：100T ; 50T

儲(chǔ)存條件：2-8℃，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder P5113 線粒體核糖體提取試劑盒

適用樣本：動(dòng)物細(xì)胞/組織

注：

1. 試劑盒2-8℃保存，開蓋后組份按要求條件保存。

2. 試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完！

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

高等植物中有兩類核糖體：一類存在于細(xì)胞質(zhì)中，沉降系數(shù)為80S；另一類存在于線粒體中。沉降系數(shù)為55S。不同生物的線粒體核糖體在組成與物理化學(xué)性質(zhì)等方面的差異均比細(xì)胞質(zhì)核糖體的大。核糖體是細(xì)胞進(jìn)行蛋白質(zhì)生物合成的部位，同時(shí)又與生物體的若干性狀，如抗性突變有關(guān)。

本試劑盒用簡(jiǎn)便快速的方法即可快速提取得到線粒體核糖體。

本試劑盒適用于提取新鮮細(xì)胞和組織樣本的線粒體核糖體，用于凍存樣本的提取時(shí)由于凍存過程中大部分線粒體可能會(huì)被破壞，線粒體核糖體回收率較低。

本試劑盒提取的線粒體核糖體具有生物活性，可以用于線粒體核糖體功能研究、蛋白提取等各種下游應(yīng)用。

本試劑盒需要使用170000×g的離心力，沒有相應(yīng)離心機(jī)的話可以選擇低速離心法的試劑盒，低速離心法試劑盒只需要達(dá)到20000×g以內(nèi)的離心力即可提取內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，一般的常規(guī)臺(tái)式離心機(jī)均可以滿足使用要求。低速離心法試劑盒提取得到的線粒體核糖體純度相對(duì)于高速離心法的較低，回收率相當(dāng)。

自備試劑和儀器：

離心機(jī)、振蕩器、渦旋混勻器、勻漿器、移液器、冰箱、冰盒，PBS緩沖液、離心管、吸頭、一次性手套

使用方法：

一、使用注意事項(xiàng)：

1、旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時(shí)液體灑落。

2、實(shí)驗(yàn)過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過程須保持樣品處于低溫。

二、操作步驟

1、取1-2×10

7個(gè)細(xì)胞，在4℃，500×g條件下離心2-3min，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集細(xì)胞。

【注】：

①組織樣本，取50-100mg新鮮動(dòng)物組織樣本，用PBS洗滌干凈，用shou術(shù)剪刀盡可能剪碎。

2、用冷PBS洗滌兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。

【注】：

①在1000×g條件下離心5分鐘

3、在沉淀中加入500μl-1ml冷的試劑A重懸，置冰上5min

4、將Dounce勻漿液勻漿30-40下，然后在4℃，500×g條件下離心5min

【注】：

①先用Dounce勻漿液的松型槌初步勻漿10-20次，再用緊型槌勻漿20-30次

②每上下一個(gè)來回為一次。

5、將上清液在1000×g條件下離心5分鐘，棄沉淀，收集上清

6、將上清液在2000×g條件下離心5分鐘，棄上清，收集沉淀。

7、將上清液在11000×g條件下離心15分鐘，棄上清，收集沉淀。

8、在沉淀中加入0.5ml提取液B，充分混勻

9、置振蕩器振蕩20min。

【注】：

①使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，提取液能輕微晃動(dòng)即可。

②沒有振蕩條件也可以不振蕩，稍微延長(zhǎng)提取液的處理時(shí)間，中間每隔幾小時(shí)用移液器吹打混勻即可。

10、在200×g條件下離心2分鐘，棄沉淀，收集上清。

11、在1000×g條件下離心2分鐘，棄沉淀，收集上清。

12、將上清液在11000×g條件下離心15分鐘，棄上清，收集沉淀。

13、在沉淀中加入500μl提取液C，充分混勻。

14、在2-8℃振蕩15分鐘。

【注】：

①使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，提取液能輕微晃動(dòng)即可。

②沒有振蕩條件也可以不振蕩，置2-8℃靜置，稍微延長(zhǎng)提取液的處理時(shí)間，中間每隔幾小時(shí)用移

液器吹打混勻即可

15、在3000×g力離心5分鐘。棄沉淀，取上清。

16、在10000×g力離心10分鐘。棄沉淀，取上清。

17、將上清在4℃，170000×g力條件下離心60分鐘。棄上清，沉淀即為線粒體核糖體。

【注】：

①如果條件允許，可將離心時(shí)間延長(zhǎng)到2-24小時(shí)。

②液體量較少?zèng)]有合適轉(zhuǎn)頭時(shí)，可以將小離心管套入大離心管進(jìn)行離心；或者用PBS補(bǔ)充液體量后用合適的離心管離心。

18、用100-400μl線粒體核糖體保存液或其他相應(yīng)的緩沖液重懸沉淀，置冰箱備用或直接用于下游實(shí)驗(yàn)。

【注】：

①可以不使用試劑盒中的保存液，根據(jù)需要使用下游試驗(yàn)的緩沖液置-80℃保存。

②保存液中保存的樣本需要重新回收的話，可以采用170000×g條件下離心60min收集沉淀。

注意事項(xiàng)：

1. 正式實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)選取幾個(gè)樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，取得優(yōu)良實(shí)驗(yàn)效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時(shí)試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會(huì)影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并徹di清除殘留清潔劑。

6. 實(shí)驗(yàn)后完成后所有樣品及接觸過的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

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