諾博萊德 細(xì)菌活力/毒性檢測試劑盒 Live/Dead Bacteria Staining Kit

細(xì)菌活力/毒性檢測試劑盒   蛋白提取

產(chǎn)品貨號：P5143

產(chǎn)品名稱：細(xì)菌活力/毒性檢測試劑盒細(xì)菌活力/毒性檢測試劑盒 Live/Dead Bacteria Staining Kit

產(chǎn)品規(guī)格：20T/100T

產(chǎn)品簡介：

英文名稱：Live/Dead Bacteria Staining Kit

規(guī)格：20T ; 100T

儲存條件：-20℃ 避光保存。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder P5143 細(xì)菌活力/毒性檢測試劑盒 Live/Dead Bacteria Staining Kit

產(chǎn)品簡介:

試劑盒包含兩種熒光染料，NucGreen是綠色核酸染料，可染色活細(xì)菌和死細(xì)菌;EthD-III是紅色核酸染料，僅染色細(xì)胞膜受損的死細(xì)菌。將NucGreen和EthD-II共同使用，具有鑒別細(xì)菌死活的能力。完整細(xì)胞膜的細(xì)菌呈現(xiàn)綠色，而具有受損細(xì)胞膜的細(xì)菌在不同通道下可分別呈現(xiàn)綠色和紅色。

細(xì)菌活力的常見標(biāo)準(zhǔn)是在合適的營養(yǎng)培養(yǎng)基中繁殖的能力，稱為生長測定。本試劑盒通常與在液體或固體培養(yǎng)基中的生長測定結(jié)果有著很好的一致性。但，在某些條件下，膜損傷的細(xì)菌可能會在營養(yǎng)培養(yǎng)基中恢復(fù)并繁殖，而這種細(xì)菌在本測定中會被認(rèn)定死菌。相反，一些具有完整膜的細(xì)菌可能無法在營養(yǎng)培養(yǎng)基中繁殖，但在本測定中會被認(rèn)定活菌。因此，若本試劑盒檢測結(jié)果和細(xì)菌生長測定之間有較大的差異，應(yīng)考慮上述可能。

光譜特性:

NucGreen: Ex/Em: 503/530nm(結(jié)合DNA)

EthD-III:Ex/Em: 530/620nm(結(jié)合DNA)

產(chǎn)品使用（僅供參考）：

以 Esc.coli 為例熒光鏡檢

(1) 在合適的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)菌至對數(shù)生長晚期。

(2) 向 EP 管中加入1mL 的菌液，5,000g 離心 15min。

(3) 去除上清液，加入1mL的0.85%NaCl溶液重懸細(xì)菌。

(4) 5,000g 離心 15 min，去除上清，加入1mL的0.85%NaCl溶液重懸細(xì)菌。重復(fù)一次。

(5) 將菌懸液密度調(diào)整到 108個細(xì)菌/mL（OD670≈0.03）。

(6) 配制染色工作液：取1μL的NucGreen 和2μL的 EthD-III，充分混勻后，加入8μL的0.85%NaCl溶液。

(7) 取1mL菌懸液，加 10μL 的染色工作液。充分混合，室溫避光孵育15min。

(8) 染色結(jié)束后，取10μL菌懸液滴加在潔凈的載玻片上，蓋玻片壓片后盡快觀察拍照，避免干片后熒光猝滅。

(9) 熒光顯微鏡成像：綠色熒光可使用 FITC適用濾光片觀察，紅色熒光可使用PI適用濾光片觀察。

注意事項

(1) 若使用孔板檢測，可靜置 10 min 后留少量菌液成像，能有效降低背景。

(2) 為更接近真實結(jié)果，Merge 圖片時建議保持紅色熒光與綠色熒光亮度一致。

(3) 在對細(xì)菌染色之前，必須注意除去生長介質(zhì)的殘留。核酸和其他培養(yǎng)基組分可能會以某種方

式結(jié)合染料，導(dǎo)致不可接受的染色變化。不建議使用磷酸鹽（PBS）緩沖液，以免降低染色效率。

(4) 正式實驗前應(yīng)依據(jù)不同菌株適當(dāng)調(diào)整染料用量及濃度。一般最好使用能夠提供充足信號的zui低染料濃度。

(5) 本產(chǎn)品僅用于科研。

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產(chǎn)品訂購信息：

P5143  細(xì)菌活力/毒性檢測試劑盒 Live/Dead Bacteria Staining Kit  20T/100T