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當前位置：北京諾博萊德科技有限公司>>生化試劑>>脂肪酸系列>> BR6011?；D移酶活性測定試劑盒 脂肪酸系列
| 供貨周期 | 現貨 | 規(guī)格 | 25T/24S |
|---|---|---|---|
| 貨號 | BR6011 | 應用領域 | 環(huán)保,化工,生物產業(yè),農林牧漁,制藥/生物制藥 |
| 主要用途 | 主要負責催化生物體內各種?；腿ヵ；磻?/td> |
?；D移酶（alcohol acyl transferase，AAT）活性測定試劑盒說明書
分光光度法
AAT 是一個多功能蛋白大家族，主要負責催化生物體內各種?；腿ヵ；磻诨虮磉_、代謝和信號傳導中具有重要作用。
AAT 催化乙酰CoA 轉移乙?；蕉〈?，釋放的 CoA 還原DTNB 生成TNB；TNB 在 412nm 有吸收峰，測定 412 nm 吸光度增加速率可計算 AAT 活性。
產品名稱 | BR6011-25T/24S | BR6011-50T/48S | Storage | |
提取液：液體 | 25ml | 50ml | 4℃ | |
試劑一：液體 | 25ml | 50ml | 4℃ | |
試劑二：粉劑 | 1 瓶 | 1 瓶 | -20℃ | |
試劑三：粉劑 | 1 支 | 1 瓶 | 4℃避光 | |
說明書 | 一份 | |||
自備儀器和用品：
研缽、冰、臺式離心機、可見分光光度計、1ml 玻璃比色皿、恒溫水浴鍋、無水乙醇。
具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準
1. 組織：按照組織質量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液）進行冰浴勻漿。8000g，4℃離心 10min，取上清置冰上待測。
2. 細菌、真菌：按照細胞數量（104 個）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細胞加入 1ml 提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3min）；然后 8000g， 4℃，離心 10min，取上清置于冰上待測。
3. 液體：直接檢測。
1、分光光度計預熱 30min，調節(jié)波長到 412 nm，蒸餾水調零。
2、工作液的配制：臨用前在試劑二瓶中加入 22.5mL 試劑一，充分混勻待用。用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。
3、試劑三的配制：臨用前加無水乙醇 1.25mL 充分溶解待用，用不完的試劑 4℃保存。
4、 空白管：在Ep 管或 96 孔板中加入 50μl 提取液和 900μL 工作液，充分混勻，35℃反應 15min，加入
50μL 試劑三，充分混勻，25℃靜置 10min，測定 412nm 處吸光值，記為 A 空白管。
5、 測定管：在 Ep 管或 96 孔板中加入 50μl 樣本和 900μL 工作液，充分混勻，35℃反應 15min，加入 50μL
試劑三，充分混勻，25℃靜置 10min，測定 412nm 處吸光值，記為A 測定管?！?/span>A=A 測定管- A 空白管，空白管只要做一管。
1、分光光度計預熱 30min，調節(jié)波長到 412 nm，蒸餾水調零。
2、工作液的配制：臨用前在試劑二瓶中加入 45ml 試劑一，充分混勻待用。用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。
3、試劑三的配制：臨用前加無水乙醇 2.5ml 充分溶解待用，用不完的試劑 4℃保存。
4、 空白管：在 Ep 管或 96 孔板中加入 50μl 提取液和 900μl 工作液，充分混勻，35℃反應 15min，加入 50μl
試劑三，充分混勻，25℃靜置 10min，測定 412nm 處吸光值，記為A 空白管。
5、 測定管：在Ep 管或 96 孔板中加入 50μl 樣本和 900μl 工作液，充分混勻，35℃反應 15min，加入 50μl
試劑三，充分混勻，25℃靜置 10min，測定 412nm 處吸光值，記為A 測定管?！?/span>A=A 測定管- A 空白管，空白管只要做一管。
（1） 按照蛋白濃度計算
活性單位定義：每毫克蛋白每分鐘催化產生 1nmol TNB 定義為一個酶活單位。
AAT (nmol/min /mg prot) = △A ÷（e×d）×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷T = 98.04×△A÷Cpr
（2） 按照樣本質量計算
活性單位定義：每克組織每分鐘催化產生 1nmol TNB 定義為一個酶活單位。
AAT (nmol/min /g 鮮重) = △A ÷（e×d）×V 反總÷(W×V 樣÷V 樣總) ÷T = 98.04×△A÷W
（3） 按細胞數量計算
活性單位定義：每 104 個細胞每分鐘催化產生 1nmol TNB 定義為一個酶活單位。
AAT (nmol/min /104cell) = △A ÷（e×d）×V 反總÷(細胞數量×V 樣÷V 樣總) ÷T
= 98.04×△A÷ 細胞數量
（4） 按液體體積計算
活性單位定義：每毫升樣品每分鐘催化產生 1nmol TNB 定義為一個酶活單位。
AAT (nmol/min /ml) = △A ÷（e×d）×V 反總÷V 樣÷T =98.04×△A
e：TNB 消光系數，13600L/mol/cm；V 反總：反應總體積，1ml；V 樣：加入反應體系中上清液體積，0.05ml；
V 樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：蛋白含量，mg/ml；W：樣本質量，g；T：反應時間，15 min。
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