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上海力晶科學(xué)儀器有限公司
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更多關(guān)于液相色譜法的介紹

時(shí)間:2014-1-16閱讀:2328
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色譜法的分離原理是:溶于流動相( phase)中的各組分經(jīng)過固定相時(shí),由于與固定相(stationary phase)發(fā)生作用(吸附、分配、離子吸引、排阻、親和)的大小、強(qiáng)弱不同,在固定相中滯留時(shí)間不同,從而先后從固定相中流出。又稱為色層法、層析法。



液相色譜法的特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn)
HPLC有以下特點(diǎn):
高壓——壓力可達(dá)150~300 Kg/cm2。色譜柱每米降壓為75 Kg/cm2以上。
高速——流速為0.1~10.0 ml/min。
——可達(dá)5000塔板每米。在一根柱中同時(shí)分離成份可達(dá)100種。
高靈敏度——紫外檢測器靈敏度可達(dá)0.01ng。同時(shí)消耗樣品少。
HPLC與經(jīng)典液相色譜相比有以下優(yōu)點(diǎn):
速度快——通常分析一個(gè)樣品在15~30 min,有些樣品甚至在5 min內(nèi)即可完成。
分辨率高——可選擇固定相和流動相以達(dá)到*分離效果。
靈敏度高——紫外檢測器可達(dá)0.01ng,熒光和電化學(xué)檢測器可達(dá)0.1pg。
柱子可反復(fù)使用——用一根色譜柱可分離不同的化合物。
樣品量少,容易回收——樣品經(jīng)過色譜柱后不被破壞,可以收集單一組分或做制備。

 

液相色譜法對流動相的基本要求是:

①與固定相不互溶,不發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。

②對樣品有適宜的溶解度,要求k值在1~10范圍內(nèi)(可用范圍)或2~5(*范圍)。溶解度太大,k值太小,不利于分離;溶解度太小,k值太大,可能使樣品在流動相中產(chǎn)生沉淀。

③必須與檢測器相適應(yīng)。例如用紫外檢測器,流動相本身在檢測波長處應(yīng)無吸收。

④流動相的粘度要小,可以降低色譜柱的阻力而提高柱效。

⑤純度高,不含機(jī)械雜質(zhì)。

在HPLC中影響因素很多,流動相只是其中一個(gè)很重要的部分,要運(yùn)用好液相色譜法還需考慮其他各個(gè)方面的因素。

 

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