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修飾位點譜圖庫的建立與磷酸化 蛋白質(zhì)組的 DIA 解析

閱讀:487      發(fā)布時間:2019-01-23
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數(shù)據(jù)非依賴采集(Data-Independent Acquisition, DIA)是當(dāng)前 熱門的質(zhì)譜采集技術(shù)之一,它以非目標(biāo)的方式將質(zhì)量范圍 分為若干窗口,依次并循環(huán)采集窗口內(nèi)所有母離子的二級碎片 [1,2]。DIA 與 SRM 類似,也是基于子離子(transition)定量, 相比傳統(tǒng)蛋白質(zhì)組學(xué)定量方法具有更好的選擇性和更高的準(zhǔn)確 度。然而,目前DIA在翻譯后修飾分析上仍有較大瓶頸。DIA 依賴于 DDA 建立譜圖庫,而 DDA 數(shù)據(jù)在搜庫鑒定時,修飾 位點定位錯誤的概率較高,特別是磷酸化修飾發(fā)生在常見的 S/T/Y 上,若肽段含有 2 個或以上位置接近的 S/T/Y,位點就 容易找錯。將含有錯誤位點信息的鑒定結(jié)果作為譜圖庫,就會 導(dǎo)致翻譯后修飾 DIA 解析結(jié)果的不可靠[3]。因此,DIA 尚難用 于大規(guī)模的翻譯后修飾樣本分析。

 

質(zhì)譜條件 質(zhì)譜儀:Orbitrap Fusion(Thermo Scientific); 離子源:NanoFlex;離子模式:正離子;噴霧電壓:1.8 kV; 毛細管溫度:275°C;S-Lens RF:60%

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