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在生物技術(shù)領(lǐng)域，離子交換色譜被廣泛應(yīng)用于電荷差異蛋白的分離，包括單克隆抗體（MAbs），其原理基于流動(dòng)相梯度變化的離子強(qiáng)度對(duì)蛋白大分子的作用力的差異，而到達(dá)分離蛋白電荷異構(gòu)體的目的。MAbs作為生化藥物已經(jīng)在治療很多疾病的過程中發(fā)揮至關(guān)重要的作用，尤其是在癌癥的治療方法，已經(jīng)商品化的MAbs藥物包括羅氏公司的帕妥珠單抗、諾華公司的依維莫司等等。

MAbs藥物的每個(gè)生產(chǎn)環(huán)節(jié)過程中，必須采用適合的方法進(jìn)行產(chǎn)品的純化和質(zhì)量控制，測(cè)定其效價(jià)、聚集體和電荷亞型變體。電荷亞型變體是在生產(chǎn)過程中產(chǎn)生的，這些副產(chǎn)物會(huì)產(chǎn)生與主產(chǎn)品不同的藥效，有時(shí)會(huì)引起嚴(yán)重的副作用。因此本文采用離子交換色譜的方法對(duì)MAbs進(jìn)行分離分析，同時(shí)考察了不同色譜條件對(duì)分離的影響。各分離模式下柱溫均為25 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)214 nm和280 nm，流速為1.0 mL/min。

（1）離子交換色譜條件：色譜柱1：ProPac WCX-10，10 µm，4×250 mm， P/N：054993；色譜柱2：MAbPac SCX-10，10 µm，4×250 mm， P/N：074625；流動(dòng)相：A：20 mmol/L MES，用NaOH調(diào)節(jié)pH=5.5； B：20 mmol/L MES，0.25 mol/L NaCl，用NaOH調(diào)節(jié)pH=5.5；進(jìn)樣量：10 µL梯度條件見表2-19：

（2）疏水作用力色譜條件：色譜柱：ProPac HIC-10，10 µm，4×250 mm， P/N：074197；流動(dòng)相：A：0.02 mol/L 醋酸鈉，調(diào)節(jié)pH= 7.0， 2 mol/L (NH4)2SO4； B：0.02 mol/L 醋酸鈉，調(diào)節(jié)pH=7.0梯度條件見表2-20

分別采用離子交換色譜（圖2-27）和疏水作用力色譜（圖2-28）分析MAbs樣品，在IEC分離模式下，MAbs出現(xiàn)六個(gè)顯著的色譜峰，它們之間存在電荷差異，依據(jù)電荷的差異在流動(dòng)相鹽梯度的條件下進(jìn)行分離，這些色譜峰為單抗的電荷變體，說明客戶提供的樣品變體含量較高；而在HIC分離模式下（圖2-28），出現(xiàn)一個(gè)色譜峰，主要原因是MAbs和固定相、流動(dòng)相之間以疏水作用力大小進(jìn)行分離，而MAbs電荷的差異對(duì)其沒有影響，因此針對(duì)不同的分離目的，采用合適的分離模式是比較重要的。比較了MAbs在MabPac SCX-10和ProPac WCX-10兩根色譜柱上的分離結(jié)果，色譜柱規(guī)格一致（4×250 mm），粒徑均為10 µm，雖然樣品濃度有差異，整體色譜圖比較接近，因此在分離MAbs樣品時(shí)，MabPac SCX-10也是一款較合適的色譜柱。