| 供貨周期 |
一個(gè)月 |
應(yīng)用領(lǐng)域 |
化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥 |
人可溶性轉(zhuǎn)鐵蛋白受體試劑盒，用于檢測多樣人樣本中該受體含量，基于雙抗夾心 ELISA 法。操作規(guī)范細(xì)致，從樣本處理到讀數(shù)多環(huán)節(jié)有注意要點(diǎn)，保障結(jié)果準(zhǔn)確。
人可溶性轉(zhuǎn)鐵蛋白受體試劑盒介紹
人可溶性轉(zhuǎn)鐵蛋白受體試劑盒，在醫(yī)學(xué)研究與臨床診斷領(lǐng)域發(fā)揮著關(guān)鍵作用，主要用于精準(zhǔn)檢測人血清、血漿、組織勻漿以及細(xì)胞培養(yǎng)上清液等樣本中的可溶性轉(zhuǎn)鐵蛋白受體（sTfR）含量。通過對 sTfR 含量的測定，能夠?yàn)樵u估人體鐵代謝狀態(tài)、診斷缺鐵性貧血等相關(guān)疾病提供重要依據(jù) 。
一、檢測原理
該試劑盒多采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）原理 。在試劑盒的酶標(biāo)板孔內(nèi)，預(yù)先包被有針對人 sTfR 的特異性捕獲抗體。當(dāng)開展檢測時(shí)，將標(biāo)準(zhǔn)品與待測樣本依次加入酶標(biāo)板孔中。樣本中的 sTfR 會(huì)迅速與包被在孔壁上的捕獲抗體特異性結(jié)合。溫育一段時(shí)間，使結(jié)合反應(yīng)充分進(jìn)行后，通過洗滌操作去除未結(jié)合的雜質(zhì)成分。隨后，加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體，該抗體能夠與已經(jīng)結(jié)合在捕獲抗體上的 sTfR 再次特異性結(jié)合，從而形成 “捕獲抗體 - sTfR - 酶標(biāo)檢測抗體" 的穩(wěn)固免疫復(fù)合物 。再次洗滌，以清除未參與反應(yīng)的多余酶標(biāo)檢測抗體。緊接著，向各孔中添加底物 TMB。在 HRP 的催化作用下，原本無色的 TMB 底物發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，逐步轉(zhuǎn)變?yōu)樗{(lán)色產(chǎn)物 。反應(yīng)持續(xù)一段時(shí)間后，加入終止液，使反應(yīng)迅速停止，此時(shí)溶液顏色由藍(lán)色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色 。由于溶液顏色的深淺程度與樣本中 sTfR 的含量呈正相關(guān)關(guān)系，借助酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測量各孔溶液的吸光度（OD 值），并依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的 OD 值繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可精準(zhǔn)推算出待測樣本中 sTfR 的濃度 。
二、操作步驟
樣本準(zhǔn)備：血清樣本采集后，需在 1000×g 的條件下離心 10 分鐘，小心分離出血清；血漿樣本同樣按此離心條件處理；細(xì)胞上清液則需以 1000×g 離心 10 分鐘，去除其中的顆粒和聚合物；組織勻漿要先將組織與適量生理鹽水混合搗碎，再經(jīng) 1000×g 離心 10 分鐘，取上清液備用 。若樣本不立即使用，應(yīng)分成小份，在 - 70℃環(huán)境下保存，防止反復(fù)凍融，使用前需在室溫下充分解凍并確保均勻 。
試劑準(zhǔn)備：從冰箱取出試劑盒后，需將所有試劑在室溫下平衡至穩(wěn)定狀態(tài)，并充分混勻 。同時(shí)，依據(jù)實(shí)驗(yàn)所需檢測的樣本數(shù)量，確定酶標(biāo)板的使用條數(shù)，標(biāo)準(zhǔn)品孔和空白孔建議設(shè)置復(fù)孔，以提高檢測準(zhǔn)確性 。
加樣：在酶標(biāo)板上精確設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、空白孔與待測樣本孔。向標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入 50μL 已稀釋好的不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品；待測樣本孔加入 50μL 處理好的樣本；空白孔則不加任何試劑 。加樣完成后，立即向各孔中加入 50μL 生wu素標(biāo)記的抗體，隨后蓋上膜板，輕輕振蕩使其充分混勻，在 37℃環(huán)境下溫育 45 分鐘 。
溫育與洗滌：溫育結(jié)束后，甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩 30 秒后甩去洗滌液，并用吸水紙拍干，此洗滌操作需重復(fù) 4 次。若使用洗板機(jī)，洗滌次數(shù)應(yīng)增加一次 。
后續(xù)反應(yīng)與檢測：每孔加入 100μL 親和鏈酶素 - HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育 30 分鐘。再次重復(fù)上述洗滌步驟 。接著，每孔加入底物 A、B 各 50μL，輕輕振蕩混勻，37℃溫育 5 分鐘 。之后，迅速向每孔加入 50μL 終止液，加入終止液后應(yīng)立即使用酶標(biāo)儀在 450nm 波長處測定各孔的 OD 值 。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出樣本中 sTfR 的濃度，若樣本進(jìn)行過稀釋，還需乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)得到實(shí)際濃度 。
三、注意事項(xiàng)
試劑盒中的所有試劑在使用前必須充分平衡至室溫，避免因溫度差異影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性 。
樣本采集、處理過程務(wù)必嚴(yán)格遵循規(guī)范操作，防止樣本受到污染或發(fā)生溶血、脂血等情況，以免干擾檢測結(jié)果 。
洗滌過程至關(guān)重要，既要確保充分去除雜質(zhì)，又要避免過度洗滌導(dǎo)致已結(jié)合的物質(zhì)脫落 。
加樣操作要精準(zhǔn)、迅速，盡量縮短各孔之間的加樣時(shí)間間隔，保證實(shí)驗(yàn)條件的一致性 。
實(shí)驗(yàn)完成后，應(yīng)盡快讀取 OD 值，避免因時(shí)間過長導(dǎo)致結(jié)果出現(xiàn)偏差 。
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