| 供貨周期 |
一個月 |
應(yīng)用領(lǐng)域 |
化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥 |
人可替丁試劑盒用于檢測人樣本中可替丁含量，采用雙抗夾心 ELISA 法。操作有序，從樣本準備到結(jié)果測定，需留意多項要點，保障檢測精準。
人可替丁試劑盒介紹
人可替丁試劑盒，在醫(yī)學(xué)研究與臨床檢測中占據(jù)重要地位，主要用于精準測定人血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中的可替丁含量?？商娑∽鳛橐活惪咕模谌梭w先天性免疫防御體系里發(fā)揮關(guān)鍵作用，對其含量的檢測有助于深入探究機體免疫狀態(tài)以及相關(guān)疾病的發(fā)病機制。
一、檢測原理
該試劑盒多采用雙抗體夾心 ELISA 法。在試劑盒內(nèi)，預(yù)先將針對人可替丁的特異性抗體穩(wěn)固包被于酶標板孔底部。當(dāng)進行檢測時，把標準品或待測樣本添加至酶標板孔中。樣本里的可替丁會迅速與包被在孔底的抗體特異性結(jié)合，經(jīng)過一段時間的溫育，未結(jié)合的雜質(zhì)通過洗滌步驟被去除。隨后，加入酶標記的可替丁抗體，此抗體能夠與已經(jīng)結(jié)合在包被抗體上的可替丁再次結(jié)合，形成穩(wěn)固的 “包被抗體 - 可替丁 - 酶標抗體" 免疫復(fù)合物。完成結(jié)合反應(yīng)后，再次進行洗滌操作，去除未參與反應(yīng)的多余酶標抗體。緊接著，向各孔中添加顯色底物。在酶的催化作用下，原本無色的底物發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，轉(zhuǎn)變?yōu)樗{色產(chǎn)物。反應(yīng)一段時間后，添加終止液，反應(yīng)停止，溶液顏色由藍色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色。通過酶標儀在特定波長（一般為 450nm）下測量各孔溶液的吸光度（OD 值）。由于溶液顏色的深淺與樣本中可替丁的含量呈正相關(guān)，所以依據(jù)標準品的 OD 值繪制標準曲線，便能準確推算出待測樣本中可替丁的濃度。
二、操作步驟
樣本準備：血清樣本需在空腹狀態(tài)下采集，采集后靜置使其自然凝固，隨后離心獲取上層血清；血漿樣本則依據(jù)不同抗凝劑要求采集，離心處理后備用；組織勻漿要按照規(guī)范方法制備，確保樣本的均一性與穩(wěn)定性。
試劑準備：將試劑盒從冰箱取出，室溫平衡 30 分鐘。按說明書要求，用蒸餾水將濃縮洗滌液稀釋成工作洗滌液。
加樣：在酶標板上準確設(shè)置標準品孔、空白孔與待測樣本孔。標準品孔加入不同濃度的標準品，空白孔不加任何試劑，待測樣本孔加入適量處理好的樣本。
溫育與洗滌：加樣完畢后，封板，37℃溫育相應(yīng)時間。溫育結(jié)束，棄去孔內(nèi)液體，用洗滌液反復(fù)洗滌酶標板，去除未結(jié)合物質(zhì)。
后續(xù)反應(yīng)與檢測：依次加入酶標抗體、顯色底物，按規(guī)定時間溫育與顯色，最后加入終止液終止反應(yīng)。使用酶標儀在 450nm 波長下測定各孔 OD 值，依據(jù)標準曲線計算樣本中可替丁濃度。
三、注意事項
試劑盒使用前必須充分平衡至室溫，防止溫度差異影響檢測結(jié)果。
樣本采集與處理過程務(wù)必嚴格遵循規(guī)范，避免溶血、脂血等異常樣本干擾檢測。
洗滌過程要徹di，確保去除雜質(zhì)，但也要防止過度洗滌導(dǎo)致已結(jié)合物質(zhì)脫落。
加樣時要準確、快速，盡量減少各孔間加樣時間差異，保證實驗條件的一致性。
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